小鼠小腦皮質(zhì)發(fā)育與神經(jīng)元凋亡關(guān)系的研究.pdf

1、小腦位于腦橋和延髓的背面及大腦枕葉的下方，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與執(zhí)行運(yùn)動(dòng)機(jī)能有關(guān)的較高級(jí)調(diào)節(jié)中樞，并且還參與了學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)活動(dòng)過(guò)程。成熟小腦皮質(zhì)有三層結(jié)構(gòu)，包括五種神經(jīng)元，在這些神經(jīng)元中最具有特征性的是巨大的Purkinje細(xì)胞和較小的顆粒細(xì)胞，Purkinie細(xì)胞是小腦皮質(zhì)的主要神經(jīng)元，顆粒細(xì)胞是小腦數(shù)量最多的神經(jīng)元。 目前人們對(duì)小腦形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)構(gòu)筑、纖維聯(lián)系、神經(jīng)遞質(zhì)及不同神經(jīng)元發(fā)生凋亡的可能機(jī)制等方面做了較為深入的研究。但

2、有關(guān)小腦皮質(zhì)的具體形態(tài)演變過(guò)程及發(fā)育中的神經(jīng)元凋亡的變化規(guī)律及可能發(fā)生的機(jī)制的資料相對(duì)較少，所以此問(wèn)題的闡清將更進(jìn)一步加深對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程規(guī)律的認(rèn)識(shí)，也為胚胎小腦移植和某些退化性神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供必要的幫助。 為了探討小鼠小腦皮質(zhì)的組織發(fā)生過(guò)程和發(fā)育中神經(jīng)元凋亡的規(guī)律和機(jī)制及兩者之間的關(guān)系，我們應(yīng)用光鏡和電鏡技術(shù)對(duì)胚胎和生后小腦皮質(zhì)進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，對(duì)生后第2天(P2)至成年鼠小腦皮質(zhì)各層厚度和細(xì)胞密度行形態(tài)學(xué)測(cè)量；用激活型Cas

3、pase-3多抗免疫組化標(biāo)記及Hoechst33258染色液染色檢測(cè)從出生至成年小鼠小腦皮質(zhì)中神經(jīng)元的凋亡，用Westernblotting方法對(duì)小腦組織中Caspase-3和Caspase-8的活化片段進(jìn)行半定量測(cè)定。 結(jié)果顯示： ①胚胎12d(E12)小腦原基有室管膜層、套層和邊緣層構(gòu)成； ②約出生當(dāng)日(PO)出現(xiàn)較典型外顆粒層、分子層、Purkinje細(xì)胞層和內(nèi)顆粒層； ③外顆粒層P6/7達(dá)最厚，至

4、P20消失； ④P0至P30，分子層原基呈CUB型曲線增厚，細(xì)胞密度呈S型曲線降低，內(nèi)顆粒層厚度呈S型曲線增加，細(xì)胞逐步分化發(fā)育成熟，密度呈cuB型曲線先增加后降低，Purkinje細(xì)胞體積呈INV型曲線增大，單位長(zhǎng)度細(xì)胞密度呈s型曲線降低，樹(shù)突樹(shù)逐漸形成，約P7時(shí)Purkinje細(xì)胞排列成單層；其發(fā)育過(guò)程中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001； ⑤免疫組化：外顆粒層、Purkinie細(xì)胞層和內(nèi)顆粒層凋亡細(xì)胞密度最高分別在

5、出生后第8天(P8)、P5及P9左右，約P20各層細(xì)胞凋亡密度都很低； ⑥Western blotting：Caspase-3活化片段的表達(dá)量在P5最高，以后漸降低至P14消失；Caspase-8活化片段的表達(dá)量從P0到P10都較高，以后略降低至。P30基本消失；其發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)元凋亡的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01。 研究結(jié)果表明：E12～P0，片層化的小腦主要經(jīng)歷了細(xì)胞增殖、分化與遷移；P0～P30，片層化的小腦逐漸