大鼠全腦缺血再灌注后HAX-1蛋白與皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的關(guān)系.pdf

1、背景:缺血性腦血管病發(fā)病后恢復(fù)腦血流是治療腦血管病最關(guān)鍵的方法,但再灌注后可加重缺血腦血管的損傷,這種損傷以凋亡為主,因此減少缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡為重要的腦保護(hù)機(jī)制。HS1相關(guān)蛋白X-1(HS1-associatedprotein X-1,HAX-1)是Src酪氨酸激酶的底物HS1(hematopoietic cell-specific Lyn substrate1,HS1)相互作用的蛋白質(zhì)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),HAX-1可以和多種蛋白

2、相互作用,具有強(qiáng)大的抗凋亡功能。已有報(bào)道HAX-1在皮膚、心肌等組織中具有抗凋亡作用,但對(duì)于腦缺血后腦組織的HAX-1表達(dá)變化與神經(jīng)元凋亡的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道,鑒于此,我們以大鼠全腦缺血再灌注為模型,觀察缺血再灌注后不同時(shí)相后,皮質(zhì)組織中HAX-1蛋白的表達(dá)水平變化,探討HAX-1蛋白與缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡之間的關(guān)系。旨在為缺血性神經(jīng)元神經(jīng)元損傷的干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為開(kāi)發(fā)治療藥物提供有價(jià)值的線索。
　　 目的:以大鼠全腦缺血再

3、灌注為模型,觀察缺血再灌注后不同時(shí)相后,皮質(zhì)組織中HAX-1蛋白的表達(dá)水平變化,探討HAX-1蛋白與缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡之間的關(guān)系。
　　 方法:采用Pulsinelli4血管法進(jìn)行改良,制作大鼠全腦缺血再灌注動(dòng)物模型。將大鼠隨機(jī)分為正常組和全腦缺血15min再灌注6h、24h、48h、72h組,每組5只。通過(guò)HE染色,觀察大鼠組織形態(tài)學(xué)變化情況,采用免疫雙標(biāo)法檢測(cè)大鼠皮質(zhì)在缺血再灌注不同時(shí)間HAX-1的表達(dá),T12NEL

4、法檢測(cè)大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況,免疫組化ABC法檢測(cè)大鼠皮質(zhì)在缺血再灌注不同時(shí)間Caspase-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)HE染色鏡下所見(jiàn):正常組腦組織結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞排列規(guī)則,細(xì)胞輪廓正常,細(xì)胞核居中,核仁清楚。缺血再灌注后72h組可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞腫脹,局灶性細(xì)胞核固縮。
　　 (2)HAX-1蛋白在缺血后大腦皮質(zhì)6h表達(dá)最高(37.60+3.45),24h、48h、72h降低,分別為(11.40±1.14)、(10

5、.40±1.52)、(9.80±1.30),且低于正常水平N(19.20±1.79)((P＜0.01)
　　 (3)正常組有少量活化的Caspase-3蛋白表達(dá),缺血6h組其表達(dá)水平顯著高于正常組,并隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸遞增的趨勢(shì)。N(35.40±7.96)、6h(72.80±5.49)、24h(106.2±6.91)、48h(129.00±19.74)、72h(166.20±15.32),P＜0.01。
　　 (4

6、)全腦缺血再灌注后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)皮質(zhì)神經(jīng)元的凋亡數(shù)目逐漸增加,N(51.00±18.38)、6h(92.00±9.06)、24h(133.80±10.64)、48h(157.00±10.83)、72h(187.80±14.96),P＜0.01。
　　 結(jié)論:全腦缺血再灌注后皮質(zhì)神經(jīng)元中HAX-1蛋白在短期缺血中表達(dá)升高,可能參與神經(jīng)元的抗凋亡,隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng),其表達(dá)水平降低,與神經(jīng)元的凋亡增強(qiáng)相關(guān)。干預(yù)HAX-1可能可以作為缺