大鼠腦缺血再灌注后大腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡的體視學(xué)觀察.pdf

1、為了觀察腦缺血再灌注后不同存活時(shí)間內(nèi)大鼠大腦皮質(zhì)不同區(qū)域細(xì)胞凋亡的變化情況，本實(shí)驗(yàn)選取42只SD大鼠，將其隨機(jī)分為對(duì)照組，缺血15min再灌注6h、12h、24h組，缺血2h再灌注6h、12h、24h組，每組6只。通過(guò)結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，動(dòng)脈夾夾閉右側(cè)頸總動(dòng)脈15min和2h后松開(kāi)動(dòng)脈夾恢復(fù)血流的方法構(gòu)建腦缺血再灌注模型。采用Hoechst33258熒光染色和Bax免疫組化方法觀察海馬CA1、CA2、CA3、CA4區(qū)、齒狀回及頂葉皮質(zhì)區(qū)細(xì)

2、胞凋亡情況，用體視學(xué)參數(shù)--體積密度(Vv)和數(shù)密度(Nv)定量地分析這些區(qū)域細(xì)胞在腦缺血再灌注后不同存活時(shí)間內(nèi)的凋亡情況。結(jié)果如下： Hoechst33258熒光染色：凋亡細(xì)胞細(xì)胞核在紫外光下呈現(xiàn)出明亮鮮艷的藍(lán)色熒光。各缺血再灌注組中上述大腦皮質(zhì)各部位凋亡細(xì)胞Vv和Nv與對(duì)照組比較均有極顯著性增大(P<0.01)。 上述大腦皮質(zhì)各部位凋亡細(xì)胞Vv和Nv變化情況：在3組缺血15min再灌注中，凋亡細(xì)胞Vv和Nv在12h顯

3、著上升(P<0.05)，海馬CA1、CA2區(qū)以及頂葉皮質(zhì)區(qū)在24h極顯著上升(P<0.01)。在3組缺血2h再灌注中，凋亡細(xì)胞Vv和Nv在12h極顯著上升(P<0.01)，海馬CA1、CA2區(qū)以及頂葉皮質(zhì)區(qū)在24h極顯著上升(P<0.01)。缺血2h再灌注后6h、12h、24h組分別與缺血15min再灌注后6h、12h、24h組比較，3個(gè)缺血2h組有顯著(P<0.05)或極顯著增大(P<0.01)。 大腦皮質(zhì)不同區(qū)域的凋亡細(xì)胞V

4、v和Nv比較：腦缺血15min再灌注后，在海馬結(jié)構(gòu)中，CA1區(qū)凋亡細(xì)胞Vv和Nv最大，CA2區(qū)其次，然后是CA3，最后為CA4。CA1與CA2、CA3及CA4比較均有極顯著性差異(P<0.01)，CA2與CA3及CA4比較有顯著性差異(P<0.05)，CA3與CA4無(wú)顯著性差異(P>0.05)。頂葉皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞Vv和Nv均高于海馬和齒狀回區(qū)，并且有極顯著性差異(P<0.01)。海馬凋亡細(xì)胞Vv高于齒狀回，而Nv無(wú)顯著性差異(P>0.0

5、5)。腦缺血2h再灌注后，CA1區(qū)凋亡細(xì)胞Vv和Nv最大，CA2區(qū)其次，然后是CA3，最后為CA4。CA1與CA2、CA3及CA4比較均有極顯著性差異(P<0.01)，CA2與CA3及CA4比較有顯著性差異(P<0.05)，CA3與CA4無(wú)顯著性差異(P>0.05)。頂葉皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞Vv和Nv高于海馬和齒狀回，并且有極顯著性差異(P<0.01)。海馬凋亡細(xì)胞Vv高于齒狀回，而Nv無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 Bax免疫組化結(jié)

6、果：Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞胞漿、胞核均著色，呈棕黃色，且Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞多為錐體細(xì)胞。各缺血再灌注組中上述大腦皮質(zhì)各部位Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞的Vv和Nv與對(duì)照組比較均有極顯著性增大(P<0.01)。 各缺血再灌注組Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv組間比較結(jié)果：在3組缺血15min再灌注中，Vv和Nv在12h顯著上升(P<0.05)，海馬CA1、CA2區(qū)以及頂葉皮質(zhì)區(qū)在24h極顯著上升(P<0.01)。在3組缺血2h再灌注

7、中，Vv和Nv在12h極顯著上升(P<0.01)，海馬CA1、CA2區(qū)以及項(xiàng)葉皮質(zhì)區(qū)在24h極顯著上升(P<0.01)。缺血2h再灌注后6h、12h、24h組分別與缺血15min再灌注后6h、12h、24h組比較，3個(gè)缺血2h組有顯著(P<0.05)或極顯著增大(P<0.01)。 Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv比較：腦缺血15min再灌注后，在海馬結(jié)構(gòu)中，CA1區(qū)Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv最大，CA2區(qū)其次，最后為CA3

8、、CA4。CA1與CA2比較有顯著性差異(P<0.05)，與CA3及CA4比較均有極顯著性差異(P<0.01)，CA2與CA3及CA4比較有顯著性差異(P<0.05)，CA3與CA4無(wú)顯著性差異(P>0.05)。與海馬比較，頂葉皮質(zhì)區(qū)Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv更大，且兩者之間有極顯著性差異(P<0.01)。在齒狀回未發(fā)現(xiàn)Bax表達(dá)。腦缺血2h再灌注后，在海馬結(jié)構(gòu)中，CA1區(qū)Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv最大，CA2區(qū)其次，然后是

9、CA3，最后為CA4，CA1與CA2、CA3及CA4比較均有極顯著性差異(P<0.01)，CA2與CA3及CA4比較有顯著性差異(P<0.05)，CA3與CA4無(wú)顯著性差異(P>0.05)。頂葉皮質(zhì)區(qū)Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞Vv和Nv均高于海馬區(qū)，且兩者之間有極顯著性差異(P<0.01)。在齒狀回未發(fā)現(xiàn)Bax表達(dá)。 各缺血再灌注組中上述大腦皮質(zhì)各區(qū)域Hoechst33258熒光染色顯示的凋亡細(xì)胞Vv和Nv與Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞V