大鼠腦缺血再灌注損傷后CathepsinL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與p38表達(dá)的研究.pdf

1、目的:腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元凋亡程序被啟動(dòng)，溶酶體組織蛋白酶L（cathepsin L）和p38蛋白均參與細(xì)胞凋亡，但兩者關(guān)系尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過采用cathepsin L抑制劑Z-FY-DMK和p38蛋白抑制劑SB203580對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型進(jìn)行干預(yù)，檢測并分析cathepsin L和p38蛋白表達(dá)變化，并分析兩者間的相關(guān)性，旨在探討cathepsin L與p38蛋白的可能關(guān)系，為缺血性腦卒中的治療提供新的思路。
　　

2、方法:選取10~12周齡，體重為（280±20）克的SD大鼠216只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham組，n=54）、腦缺血再灌注模型組（IRI組，n=54）、cathepsin L抑制劑組（CLI組，n=54）、p38抑制劑組（SB組，n=54）。按Longa法制作大鼠大腦中動(dòng)腦缺血再灌注模型。缺血再灌注時(shí)間點(diǎn)分為2h、6h、12h和24h，四組的時(shí)間點(diǎn)設(shè)置相同。假手術(shù)組除了插線深度不同，其他手術(shù)流程同模型組。CLI組和 SB組分別于造模前

3、30分鐘右側(cè)側(cè)腦室注射Z-FY-DMK（20μg/1μl×5μl）和 SB203580（0.1nmol/μl×5μl），假手術(shù)組和模型組于同一時(shí)間點(diǎn)和同一部位注射與干預(yù)劑等量10ml/L的DMSO溶液。采用Longa's的5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分法對(duì)大鼠行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。運(yùn)用TTC染色法檢測各組再灌注后24h亞組腦梗死體積，TUNEL法觀察各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)目，western blot法檢測各組cathepsin L和p-p38&nb

4、sp;蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.造模成功率87％。
　　2.TTC染色法檢測到，sham組未見明顯梗死灶，IRI組、CLI組、SB組梗死體積分別為22.89%、17.09%、18.37%，CLI組、SB組分別與模型組比較，梗死體積明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.TUNEL法觀察到，sham組未見凋亡細(xì)胞，IRI組2h、6h、12h、24h均可見到凋亡細(xì)胞（細(xì)胞核被染成黃色或棕黃色），且隨著時(shí)間點(diǎn)

5、延長凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸升高，CLI組、SB組于2h、6h、12h、24h也可見到凋亡細(xì)胞，且在同一時(shí)間點(diǎn)各組凋亡細(xì)胞數(shù)較 IRI組明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.Western blot法檢測cathepsin L表達(dá)，sham組可見少量cathepsin L蛋白表達(dá)，IRI組cathepsin L蛋白于再灌注后2h開始表達(dá)，6h、12h呈上升趨勢，12h達(dá)高峰，24h開始下降，較sham組cathepsin L蛋白表達(dá)明顯增

6、多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CLI組cathepsin L蛋白于再灌注后2h開始表達(dá)，6h、12h呈上升趨勢，12h達(dá)高峰，24h開始下降，各時(shí)間點(diǎn)較 IRI組明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SB組cathepsin L蛋白2h開始表達(dá)，6h、12h呈上升趨勢，12h達(dá)高峰，24h開始下降，各時(shí)間點(diǎn)與IRI組比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5. Western blot法檢測p-p38蛋白表達(dá)，sham組可見少量p-p38蛋白表達(dá)，I

7、RI組p-p38蛋白的表達(dá)于再灌注后2h、6h、12h、24h呈連續(xù)上升趨勢，較sham組p-p38蛋白表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CLI組p-p38蛋白表達(dá)于再灌注后2h、6h、12h、24h呈連續(xù)上升趨勢，各時(shí)間點(diǎn)較IRI組比較明顯減少， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SB組p-p38蛋白表達(dá)于再灌注后2h、6h、12h、24h呈連續(xù)上升趨勢，各時(shí)間點(diǎn)較IRI組比較明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.Cathepsin