大鼠腦缺血再灌注損傷Cathepsin D介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與ERK1-2信號通路的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　本實驗通過建立大鼠大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型，檢測腦梗死體積、腦缺血再灌注后不同時間點Cat D、p-ERK1/2及細(xì)胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)執(zhí)行蛋白酶Caspase-3的表達(dá)，以及使用Cat D的抑制劑Pepstatin A干預(yù)后對腦梗死體積、p-ERK1/2、Caspase-3表達(dá)的影響，來推測二者之間可能存在的相關(guān)關(guān)系，旨在探討大鼠腦缺血再灌注后C

2、at D介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與ERK1/2信號通路的關(guān)系及Pepstatin A對腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)保護功能。
　　方法:
　　清潔級健康雄性Sprague-Dawley大鼠72只，體重260～300g，10～12周齡。應(yīng)用隨機數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組（12只）、生理鹽水對照組（30只）及Pepstatin A干預(yù)組（30只），其中對照組及干預(yù)組分別按不同時間點設(shè)置為缺血再灌注后6h、12h、24h和48h亞組（48h亞組為

3、12只，其余各亞組為6只）。假手術(shù)組、生理鹽水對照組48h亞組、Pepstatin A干預(yù)組48h亞組中隨機取6只用于梗死體積檢測，另6只除同其余各組參與Cat D、p-ERK1/2 western blot檢測外，另行Caspase-3 western blot檢測。干預(yù)組在腦缺血再灌注即刻和以后每12小時各腹腔注射Pepstatin A注射液0.2ml/10g，對照組于相同時間點注射等量生理鹽水。
　　結(jié)果:
　　1.模

4、型成功率為81.82％。
　　2.行為學(xué)評價顯示，假手術(shù)組的神經(jīng)功能缺損評分為0分，相同時間點Pepstatin A干預(yù)組的神經(jīng)功能缺損評分均顯著性低于生理鹽水對照組（P均<0.05）。
　　3.TTC染色顯示，假手術(shù)組均未見梗死灶，生理鹽水對照組48h亞組及Pepstatin A干預(yù)組48h亞組相對腦梗死體積分別為（26.40±1.45）%和（13.14±1.94）%，具有顯著性差異（P=0.000）。
　　4.We

5、stern blot法檢測Cat D蛋白的表達(dá)：生理鹽水對照組Cathepsin D蛋白的表達(dá)在腦缺血再灌注后6h、12h、24h呈上升趨勢，24h達(dá)到高峰，48h仍維持在較高水平，與假手術(shù)組相比，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）；Pepstatin A干預(yù)組該蛋白的表達(dá)在相應(yīng)時間點較生理鹽水對照組均明顯減少（P均<0.05）。
　　5.Western blot法檢測p-ERK1/2蛋白的表達(dá)：生理鹽水對照組p-ERK1/2

6、蛋白的表達(dá)在腦缺血再灌注后6h、12h呈上升趨勢，12h達(dá)到高峰，24h仍維持在較高水平，48h有所下降，但仍高于假手術(shù)組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）；Pepstatin A干預(yù)組該蛋白的表達(dá)在相應(yīng)時間點較生理鹽水對照組有所增加（P均<0.05）。
　　6.Western blot法檢測Caspase-3蛋白的表達(dá)：Caspase-3蛋白表達(dá)的相對灰度值在假手術(shù)組、生理鹽水對照組48h亞組、Pepstatin A干預(yù)組