大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后PAP1基因的表達(dá)變化與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、第一部分大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型的建立及細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 目的：采用前房高壓灌注方法建立RIR損傷模型，并檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的情況。 方法：72只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和RIR損傷組。RIR組分別包括6個(gè)亞組即再灌注后3h、6h、12h、24h、72h、和7d，每亞組6只，采用前房高壓灌注法(110mmHg×60min)建立大鼠RIR損傷模型。應(yīng)用尼氏染色觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)改變，應(yīng)用核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP末端標(biāo)

2、記法(TUNEL)原位檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞。 結(jié)果：1、在大鼠前房高壓灌注建模過(guò)程中，可以清楚觀察到模型動(dòng)物發(fā)生視網(wǎng)膜缺血.血液復(fù)流征象。 2、RIR后視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)改變：尼氏染色結(jié)果顯示RIR后6h、12h內(nèi)叢狀層出現(xiàn)水腫及空泡形成，24h可見(jiàn)核固縮；RIR后7d視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層則明顯變?。慌c正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3、視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況：對(duì)照組視網(wǎng)膜在各時(shí)間點(diǎn)偶見(jiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞；與對(duì)照組比較：R

3、IR組于再灌注后6h、12h、24h和、72h視網(wǎng)膜TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞顯著性增多(P<0.01)，72h時(shí)則明顯減少；而7d時(shí)，TUNEL阻性細(xì)胞極少見(jiàn)。TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞主要位于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)核層，外核層均未見(jiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)論：采用升高眼壓(110mmHg×60nun)的方法能成功建立伴視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的RIR損傷模型。 第二部分 PAP1基因在大鼠視網(wǎng)膜RIR中表達(dá) 目的：了解PAP1基因在大

4、鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)情況及RIR損傷后PAP1基因表達(dá)的變化 方法：120只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和RIR組，分別包括6個(gè)亞組即再灌注后3h、6h、24h、72h及7d組，每組10只。RT-PCR方法及原位雜交方法檢測(cè)PAP1基因在正常視網(wǎng)膜中的表達(dá)及RIR后表達(dá)的變化。 結(jié)果：1、PAP1基因大鼠視網(wǎng)膜組織中有表達(dá)；其表達(dá)部位主要在視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)核層。 2、與正常對(duì)照組相比，RIR組PAPl-mRNA的表達(dá)在RI

5、R損傷后3h表達(dá)增加(P<0.01)；RIR損傷后6h、12h、24h其表達(dá)明顯減少，至24h達(dá)最低值(P<0.01)；RIR損傷后72h、7d組其表達(dá)增加(P<0.01)。 3、原位雜交法觀察顯示：與對(duì)照組比較，PAP1基因在RIR損傷后3h表達(dá)增加(P<0.01)；RIR后6h、12h、24h其表達(dá)明顯減少，；RIR后72h、7d其表達(dá)又開(kāi)始增加(P<0.01)；其表達(dá)部位主要在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)核層。 結(jié)論：1

6、、PAP1基因在大鼠視網(wǎng)膜組織中有表達(dá)。 2、RIR損傷后PAP1基因的表達(dá)有變化。 第三部分 RIR損傷后PAP1基因表達(dá)與細(xì)胞凋亡 目的：探討RIR損傷后PAP1基因表達(dá)的變化與所致細(xì)胞凋亡的關(guān)系，以期進(jìn)一步了解RIR損傷致細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。 方法：采用前房高壓灌注(110mmHg×60min)建立大鼠RIR損傷模型。 1.48只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和RIR組，分別包括6個(gè)亞組即再灌注后3

7、h、6h、12h、24h、72h和7d每亞組4只，用TUNEL法原位檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況。 2.60只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和RIR組，RIR組同樣分為6個(gè)亞組即再灌注后3h、6h、12h、24h、72h、7d，每亞組5只，用半定量RT-PCR方法檢測(cè)PAPl-mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1、與對(duì)照組相比較：RIR損傷后3h，視網(wǎng)膜TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞無(wú)明顯變化(P>0.05)，RIR損傷后6h、12h、24h

8、、72h視網(wǎng)膜TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加(P<0.01)。RIR后7d時(shí)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞極少見(jiàn)(P>0.05)。 2、與對(duì)照組相比較：PAPl-mRNA的表達(dá)在RIR后3h有所增加(P<0.01)而RIR損傷6h、12h、24h則明顯減少；RIR損傷后72h、7d時(shí)又開(kāi)始增加(P<0.01)。 3、PAP1基因表達(dá)與細(xì)胞凋亡之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.679，P<0.01)。 結(jié)論：PAP1基因在RIR損傷致細(xì)胞凋