大鼠腦缺血再灌注損傷后IRAK1的表達(dá)變化及其相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察大鼠腦缺血再灌注損傷后大腦皮層中白介素1相關(guān)受體激酶1（IRAK1）的表達(dá)變化并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1.在體實(shí)驗(yàn):將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)組、缺血再灌注組，根據(jù)再灌注時(shí)間不同，分為6h、12h、1d、3d、7d組。采用改良的Pulsinelli四血管閉塞法，建立大鼠全腦缺血再灌注模型，應(yīng)用Western Blot、免疫組織化學(xué)、免疫熒光方法檢測各組皮層的IRAK1和Cx43蛋白的表達(dá);

2、在造模前1h予以大鼠腹腔注射Gap26，用Western Blot方法測定IRAK1的表達(dá)。
　　2.離體實(shí)驗(yàn):采用二氯化鈷誘導(dǎo)C6細(xì)胞，建立星形膠質(zhì)細(xì)胞化學(xué)性缺氧模型，根據(jù)刺激時(shí)間不同分為1h、3h、6h、12h、24h組，應(yīng)用Western Blot方法測定IRAK1和Cx43蛋白的表達(dá);運(yùn)用siRNA小干擾載體去除培養(yǎng)細(xì)胞中的IRAK1，用Western Blot方法測定Cx43蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?。ㄒ?/p>

3、）在體實(shí)驗(yàn):(1) IRAK1蛋白在假手術(shù)組大鼠大腦皮層中表達(dá)較低;與假手術(shù)組比較，IRAK1蛋白在大鼠全腦缺血再灌注損傷后6h開始升高，3d時(shí)達(dá)到高峰，7d時(shí)表達(dá)有所下降; Cx43蛋白在假手術(shù)組大鼠大腦皮層中表達(dá)較低;與假手術(shù)組比較，Cx43蛋白在大鼠全腦缺血再灌注后6h開始升高，3d時(shí)達(dá)到高峰，7d時(shí)有所回調(diào);通道蛋白Cx43與IRAK1表達(dá)有偶聯(lián)樣改變。(2)通過免疫組織化學(xué)法檢測IRAK1蛋白在大腦皮層的表達(dá)，結(jié)果顯示，IRA

4、K1蛋白在假手術(shù)組中的大腦皮層表達(dá)較低;與假手術(shù)組比較，IRAK1蛋白在缺血再灌注損傷中表達(dá)明顯增高，具有顯著差異。(3)通過免疫熒光雙標(biāo)方法檢測IRAK1蛋白在腦中的細(xì)胞定位，結(jié)果顯示，在假手術(shù)組和缺血再灌注損傷組中，大鼠大腦皮層中GFAP表達(dá)(+)的細(xì)胞IRAK1表達(dá)(+)、在Neun表達(dá)(+)的細(xì)胞中IRAK1表達(dá)（-）、在IBA1表達(dá)(+)的細(xì)胞IRAK1（-）;與假手術(shù)組相比，全腦缺血再灌注損傷后皮層中IRAK1蛋白表達(dá)明顯增

5、高，具有顯著性差異。(4)使用Gap26干預(yù)Cx43蛋白表達(dá)后，IRAK1的表達(dá)同樣下調(diào)，與未干預(yù)組比較有顯著性差異。
　　（二）離體實(shí)驗(yàn):(1) IRAK1蛋白在正常對照組表達(dá)較低，在二氯化鈷刺激后，IRAK1蛋白在星形膠質(zhì)細(xì)胞中在刺激后3h開始顯著增加，6h達(dá)到高峰，12h已降至正常水平;Cx43蛋白的表達(dá)在3h開始上調(diào)，并在6h到高峰，12h開始下降，具有顯著差異。(2)在化學(xué)性缺血缺氧模型中，干預(yù)IRAK1蛋白表達(dá)后，Cx

6、43蛋白的表達(dá)也相應(yīng)下降，與未干預(yù)組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠全腦缺血再灌注損傷后IRAK1和Cx43蛋白表達(dá)均增高，呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，且兩者表達(dá)有偶聯(lián)樣改變。
　　2.IRAK1主要定位于星形膠質(zhì)細(xì)胞，而通道蛋白Cx43在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)最多，兩者定位相同。
　　3.抑制IRAK1蛋白的表達(dá)同時(shí)能抑制Cx43蛋白的表達(dá)，使用特異性通道阻斷劑Gap26抑制Cx43蛋白的表達(dá)也能抑制IRAK1蛋