頭針對腦缺血再灌注大鼠腦組織血管新生影響的相關機制研究.pdf

1、腦卒中是目前嚴重危害我國中老年人生命與健康的疾病，本病突出表現(xiàn)為高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率、高復發(fā)率，每年我國有200萬人新發(fā)腦卒中，150萬人死于腦卒中，其中腦梗死占了全部腦卒中的60～80％，因其居高不下的致死率及致殘率給國家和眾多家庭造成沉重的經(jīng)濟和生活負擔，故其已成為現(xiàn)代醫(yī)學研究的熱點課題。大量研究證明，缺血性腦損傷是一系列復雜的多環(huán)節(jié)的病理生理變化過程，早期主要以自由基產(chǎn)生、腦水腫、興奮性氨基酸毒性為主；中期以炎癥、神經(jīng)元凋

2、亡為主；后期以神經(jīng)再生、血管新生和膠質細胞增殖等腦重構表現(xiàn)為主。
　　腦缺血后，血管新生是腦微循環(huán)修復重建的一個重要病理生理過程。血管新生的程度與卒中后神經(jīng)功能恢復的程度成正相關。血管內皮生長因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的最強有力的血管形成因子。研究表明，腦缺血、缺氧可誘導血管內皮生長因子及其受體的表達，應用外源性VEGF可促進腦缺血半暗帶新生血管的形成，并減少腦梗死體積；環(huán)氧化酶-2(COX-2)是花生四烯酸轉化為前列腺素過程中的

3、重要限速酶。近年來大量研究表明，COX-2是參與血管新生的重要因子之一；血管生成素(angiopoietins，Ang)是一族特異性作用于血管內皮細胞的生長因子，它們與血管內皮凋亡、血管形成后期的成熟、穩(wěn)定性及重建方面均具有極大的相關性。近年來諸多研究均證實，三者對血管新生有重要作用，是近年來國際上興起的新的研究領域，但其中有關中醫(yī)藥、針灸的促血管生成作用的研究相對較少，尤其是關于頭針的促血管新生的研究鮮有報道。
　　目的：根據(jù)上

4、述分析，本研究在大鼠局灶性腦缺血模型的基礎上，采用改良線栓法制備MCAO模型，擬“醒腦開竅，祛瘀生新”為治則，取頂顳后斜線、頂顳前斜線，通過觀察頭針對局灶性腦缺血再灌注大鼠缺血腦組織微血管超微結果的影響，以及對VEGF、COX-2、Ang-1三者表達的影響，從而探討頭針療法對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠腦內血管新生影響的可能作用機制。
　　方法：將清潔級SD雄性大鼠100只隨機分為模型組（按缺血再灌注6h、24h、48h、96h分4

5、組）、頭針組（缺血再灌注6h、24h、48h、96h分別加電針刺激，分4組）、假手術組（大鼠麻醉切開頸部皮膚后，僅分離CCA及IPA至PPA，不插線栓）、正常對照組（大鼠不予處理，正常給水給食），每組10只。各組大鼠采用Zea-Longa評分方法，隨相應時相評定動物神經(jīng)功能缺損。分別采用免疫組化SABC法檢測腦缺血再灌注后各時間點因子Ⅷ相關抗原(FⅧR：Ag)的表達，采用RT-PCR技術檢測各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內Ang-1mRNA的

6、表達水平，采用免疫組化法檢測各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內VEGF、ES的表達水平，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、熒光定量PCR檢測檢測各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內COX-2的表達水平。結果：（1）大鼠局灶性腦缺血再灌注后，頭針組和對照組大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙，主要表現(xiàn)有：腦梗死灶對側前肢內收、肩內旋，提尾懸空時左前肢不能伸直或緊貼胸壁，行走時向右側轉圈、傾倒，肌張力降低等。采用Zea-Longa評分方法，24h后頭針組和對照組大鼠CI/

7、RP后神經(jīng)功能均逐漸恢復，但頭針組較對照組大鼠恢復得更好，在96h時差異最為顯著。（2）采用免疫組化SABC法檢測FⅧR：Ag，頭針組與模型組比較，F(xiàn)ⅧR：Ag在腦微血管的表達在缺血后24h開始增加(P＜0.05)并持續(xù)上升，腦缺血后96h的差異具有極顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，頭針治療隨時間的延長可使其表達持續(xù)升高。由此可見頭針治療能夠有效促進腦組織缺血半影區(qū)內微血管的新生，并且具有明顯的累加蓄積效應。（3）采用免疫組化法檢測A

8、ng-1mRNA，正常對照組、假手術組Ang-1mRNA中等量表達，與模型組比較，頭皮針組各時間點大鼠腦組織Ang-1mRNA含量均相對增多，其中腦缺血再灌注48h Ang-1mRNA含量達高峰，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01，P<0.05）；（4）采用免疫組化法檢測 VEGF及ES，正常對照組、假手術組VEGF中等量表達，與模型組比較，頭皮針組各時間點大鼠腦組織 VEGF含量增多，ES含量減少，其中腦缺血再灌注48h V

9、EGF含量達高峰，24h ES含量達最低峰，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01，P<0.05）；（5）采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、熒光定量PCR檢測COX-2，正常對照組、假手術組COX-2少量表達，于模型組比較，頭皮針組各時間點大鼠腦組織COX-2 mRNA及蛋白含量均減少，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其中腦缺血再灌注24hCOX-2 mRNA含量、96h COX-2蛋白含量與模型組比較，差異最為顯著（P<0.