電針對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織血管新生及HGF、HIF-1α表達(dá)的影響.pdf

1、目的：腦血管病的發(fā)病率,死亡率及致殘率均很高,為三大致死病因之一,每年死于腦卒中的患者約150萬人,其中75％～85%為缺血性腦血管病(isthemic cerebral vascular disease,ICVD)。局灶性缺血性腦血管病是由于腦血管被血栓因子或其他病理代謝產(chǎn)物阻塞,從而導(dǎo)致腦血管供血范圍的腦血流量下降,使腦局部的組織缺氧和腦細(xì)胞的死亡,形成以中心壞死區(qū)及其周圍的缺血半暗帶組成的局部梗死病灶。研究發(fā)現(xiàn)腦缺血后形成的缺血半

2、暗帶有大量的細(xì)胞凋亡。此時(shí)機(jī)體需做出反應(yīng)來維持機(jī)體氧的平衡與穩(wěn)態(tài)來抵抗這種不利因素,其中一種重要機(jī)制就是誘導(dǎo)新生血管形成,改善側(cè)支循環(huán),增加腦血流量來補(bǔ)償血氧代謝的不足以挽救瀕死的神經(jīng)細(xì)胞。若在此時(shí)能夠運(yùn)用有效的手段來改善缺血區(qū)局部的血液循環(huán),增加腦血流量來補(bǔ)償血氧代謝的不足,則可阻止缺血半暗帶細(xì)胞凋亡,保護(hù)腦神經(jīng)。既往發(fā)現(xiàn)通過針灸刺激促進(jìn)腦缺血局部血管新生可認(rèn)為是目前有效增加腦血流量的一種可行方法。
　　 研究表明,腦血管閉塞

3、以后缺血區(qū)血管增生,其增生的程度和范圍直接關(guān)系到半暗帶血流的改善,影響神經(jīng)元生理功能的恢復(fù)。腦血管閉塞以后,缺血區(qū)血管增生,有自發(fā)形成側(cè)支循環(huán)趨向,但不足以代償原有的血供,缺血得不到糾正。結(jié)合導(dǎo)師以往的研究表明電針對促進(jìn)局灶性腦缺血大鼠腦血管新生有一定的作用,但其影響血管新生的作用因子和作用因素眾多。故本課題以MCAO再灌注大鼠為模型,觀察腦缺血再灌注后不同時(shí)段電針“百會”、“水溝”、雙側(cè)“足三里”穴對大腦皮質(zhì)層HGF、HIF-1α表達(dá)

4、的影響,從血管新生角度進(jìn)一步探討電針有效保護(hù)和改善腦缺血腦損傷作用機(jī)制。
　　 方法：采用Longa的線栓改良法制備大鼠右側(cè)缺血再灌注模型,挑選健康成年SD大鼠120只,隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)對照組、缺血再灌注模型對照組(按缺血1h后再灌注1/2d、1d、2d、4d、7d分為五個(gè)亞組)、電針治療組(按缺血1h后再灌注1/2d、1d、2d、4d、7d五個(gè)亞組加電針治療五個(gè)亞組),正常組和假手術(shù)對照組,其每組各10只,模型對照組

5、和治療組中每個(gè)亞組各10只SD大鼠。正常對照組,模型對照組、假手術(shù)對照組均不予治療,電針組采用韓式電針儀以疏密波,2Hz/15Hz,30min,取“百會”,“水溝”,雙側(cè)“足三里”治療,早晚各一次,每隔12h治療一次。每次治療完后均記錄各組及亞組SD大鼠的神經(jīng)癥狀學(xué)評分。按缺血再灌各時(shí)間快速多聚甲醛心臟內(nèi)固定,并迅速分離出已固定好的大腦,取視交叉平面前后2mm部分,做石蠟包埋切片。常規(guī)處理,各組切片經(jīng)過HE染色后在光鏡下從形態(tài)學(xué)角度觀察

6、大鼠腦缺血組織前后的改變。每組切片常規(guī)處理后采用免疫組化S-ABC法光鏡下觀察各組大鼠腦皮質(zhì)部的CD31、HGF、HIF-1α陽性表達(dá),每張腦切片均隨機(jī)選取五個(gè)10×40倍視野觀察并進(jìn)行計(jì)數(shù)。所得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,方差齊性檢測后把所有數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后結(jié)果亦用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：(1)行為學(xué)評分觀察:模型組與電針組均出現(xiàn)較

7、明顯的神經(jīng)損傷癥狀,電針組神經(jīng)癥狀學(xué)評分再灌注后1/2d、1d、2d、4d、7d組分別和模型組相比,癥狀明顯減輕。
　　 (2)HE染色:正常組和假手術(shù)組沒有見到神經(jīng)元變性或壞死和膠質(zhì)細(xì)胞的增生。模型組的神經(jīng)細(xì)胞壞死面積總體上要大于電針組,但是膠質(zhì)細(xì)胞的增生小于電針組;電針組的血管增生速度要明顯快于模型組。
　　 (3)微血管密度:正常組和假手術(shù)組大鼠腦組織中幾乎無CD31陽性表達(dá),模型組CD31微血管在缺血再灌注1d迅

8、速上升,持續(xù)升高至再灌注7d。缺血區(qū)周圍CD31陽性表達(dá)明顯增多,梗死灶周圍的小血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿呈棕黃色,排列密集,呈強(qiáng)陽性表達(dá)。電針組與模型組表達(dá)基本一致,但更加廣泛,在相對應(yīng)時(shí)間段內(nèi),電針組與模型組比較均有顯著差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (4)HGF在大鼠腦缺血區(qū)皮質(zhì)的表達(dá):正常組和假手術(shù)組大鼠腦組織中只有少量HGF陽性表達(dá);模型組、電針組陽性表達(dá)明顯增多,與正常組和假手術(shù)組比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0

9、5),其中7d達(dá)到高峰;在相對應(yīng)的時(shí)間段內(nèi),電針組的陽性表達(dá)高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05或P＜0.01),電針能上調(diào)腦缺血再灌注大鼠腦內(nèi)HGF的表達(dá)。
　　 (5)HIF-1α在大鼠腦缺血區(qū)皮質(zhì)的表達(dá):正常組和假手術(shù)組大鼠腦組織中只有少量HIF-1α陽性表達(dá),模型組、電針組陽性表達(dá)明顯增多(P＜0.05),其中7d達(dá)到高峰;在相對應(yīng)的時(shí)間段內(nèi),電針組的陽性表達(dá)高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05或P＜0.01