電針對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦血管再生及血腦屏障變化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 本課題在導(dǎo)師前期研究成果基礎(chǔ)上,采用改良線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,以“益氣活血,祛瘀生新”為法則,取“百會(huì)”、“水溝”、“足三里”穴,觀察電針對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)行為學(xué),腦TTC染色、HE染色,腦組織中HIF-1α表達(dá),MVD(CD34+細(xì)胞)計(jì)數(shù),血清白蛋白(Alb)水平及血腦屏障通透性指標(biāo)——S100β蛋白血清含量的影響,從而探討電針對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后血管再生的調(diào)節(jié)機(jī)制,并試圖初步探

2、索電針治療促血管新生與血腦屏障保護(hù)之間的相互關(guān)系。
　　 方法:
　　 將84只180g～220g清潔級(jí)雄性sD大鼠按照數(shù)字表隨機(jī)分為4組,分別為正常對(duì)照組12只(不予處理,正常飼養(yǎng));假手術(shù)組12只(僅分離CCA及IPA至PPA,不插線栓);模型組30只(改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型,按照缺血/再灌注24h、48h、72h又分為3個(gè)亞組,每亞組10只);電針組30只(改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型,按照缺

3、血/再灌注24h、48h、72h又分為3個(gè)亞組,每亞組10只,加電針治療)。電針組使用HANS-200A型韓式穴位神經(jīng)刺激儀,采用疏密波(頻率2Hz/15Hz),電流強(qiáng)度約1 mA,以引起局部肌肉稍稍顫動(dòng)為度,刺激“百會(huì)”、“水溝”、“足三里”穴,每次持續(xù)刺激30 min,缺血再灌注2h后行第1次電針刺激,每隔12h再電針刺激1次。分別采用Zea-longa評(píng)分法觀察實(shí)驗(yàn)大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化;取腦組織,制片,HE染色,普通光鏡下觀察腦大體

4、結(jié)構(gòu)變化;TTC染色計(jì)算腦梗死體積比例;免疫組化SP法檢測(cè)HIF-1α表達(dá),MVD(CD34+細(xì)胞)計(jì)數(shù)(Weidner法);取血清標(biāo)本,澳甲酚氯(BCG)法測(cè)定白蛋白濃度水平,ELISA法測(cè)定S-100β蛋白含量;干濕重法計(jì)量腦含水量(％)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)腦組織HE染色光鏡觀察:正常對(duì)照組、假手術(shù)組無(wú)異常。模型組、電針組大鼠腦組織HE染色顯示缺血后神經(jīng)元損傷病理改變隨再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)由輕至重。電針組大鼠腦

5、組織缺血壞死區(qū)結(jié)構(gòu)較正常對(duì)照組、假手術(shù)組疏松,但間質(zhì)水腫不明顯,壞死細(xì)胞數(shù)量較模型組有所減少,排列較模型組規(guī)則。
　　 (2)Zea-longa評(píng)分:正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠均未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺失癥狀。在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h～72h),模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分在缺血/再灌注24h最高,處于峰值,隨后逐漸下降,至缺血/再灌注72h神經(jīng)功能評(píng)分仍然較高,與正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠比較,P＜0.01,有非常顯著差異性

6、。電針組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分在缺血/再灌注24h也是最高,該峰值與模型組峰值比較,P＜0.05,有顯著差異。電針組大鼠與模型組相比較,缺血/再灌注24h時(shí)間點(diǎn)它們的神經(jīng)功能評(píng)分之間出現(xiàn)顯著差異,P＜0.05;缺血/再灌注48h～72h時(shí)間段內(nèi)它們的神經(jīng)功能評(píng)分之間出現(xiàn)非常顯著差異,P＜0.01.電針組大鼠在缺血/再灌注72h時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分并未能恢復(fù)到正常水平,與正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠比較還是有非常顯著差異,P＜0.01。
　　

7、 (3)HIF-1α的表達(dá):正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)出現(xiàn)微量HIF-1α的表達(dá),兩者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異性,P＞0.05。模型組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達(dá)隨缺血/再灌注時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加,在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)至缺血/再灌注72h時(shí)出現(xiàn)最高點(diǎn),并在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均與正常對(duì)照組、假手術(shù)組形成非常顯著差異,P＜0.01。而電針組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達(dá)也是隨缺血/再灌注時(shí)間廷長(zhǎng)不斷增加,且勢(shì)頭較模型組強(qiáng)勁,在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)至缺血/再灌注

8、72h同樣出現(xiàn)最高點(diǎn),該峰值與模型組峰值比較出現(xiàn)顯著差異,P＜0.05;同樣在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)電針組大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達(dá)也與正常對(duì)照組、假手術(shù)組形成非常顯著差異,P＜0.01。
　　 (4)腦梗死體積比:正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠均未出現(xiàn)腦梗死.在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h～72h),模型組和電針組大鼠腦梗死體積比呈現(xiàn)一個(gè)基本正態(tài)分布,都是在缺血/再灌注48h最大,處于峰值。在缺血/再灌注24h時(shí)間點(diǎn),電針組與模型

9、組比較,大鼠腦梗死體積比之間有顯著差異,P＜0.05;在缺血/再灌注48h～72h時(shí)間段內(nèi),電針組與模型組比較,大鼠腦梗死體積比之間有非常顯著差異,P＜0.01。與模型組比較,電針組在缺血/再灌注24h時(shí)間點(diǎn)大鼠腦梗死體積比減少幅度較小,缺血/再灌注48h～72h時(shí)間段大鼠腦梗死體積比減少幅度增大,以缺血/再灌注72h時(shí)間點(diǎn)為最大。
　　 (5)缺血腦區(qū)MVD計(jì)數(shù):正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)MVD極小,幾乎為零,且它們之間無(wú)統(tǒng)

10、計(jì)差異,P＞0.05。模型組大鼠腦內(nèi)缺血區(qū)MVD隨缺血/再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而增加,但是增長(zhǎng)幅度有限,其在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(缺血/再灌注24h～72h)與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較形成非常顯著性差異,P＜0.01.電針組大鼠腦內(nèi)缺血區(qū)MVD也隨缺血/再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而增加,且增長(zhǎng)幅度很大,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(尤其是缺血/再灌注72h),與模型組比較形成非常顯著性差異,P＜0.01;同時(shí)其與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較也在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上形成非常顯著差異,P＜0.01

11、.
　　 (6)血清白蛋白水平:正常對(duì)照組大鼠血清白蛋白水平穩(wěn)定;與正常對(duì)照組比較,假手術(shù)組大鼠血清白蛋白水平除在缺血/再灌注24h時(shí)間點(diǎn)有輕度下降(但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P＞0.05)外,其余時(shí)間段無(wú)明顯變化與正常對(duì)照組十分接近。模型組和電針組(特別是模型組)大鼠血清白蛋白水平在整個(gè)觀察時(shí)間窗內(nèi)都呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì),與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較,均具有非常顯著差異,P＜0.01.在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)電針組大鼠血清白蛋白水平與模型組比較,均具有顯

12、著差異,P＜0.05。
　　 (7)血清S-100β蛋白濃度:正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清S-100β蛋白均未被檢測(cè)到。模型組、電針組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清中都檢測(cè)到S-100β蛋白,且與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較具有非常顯著性差異,P＜0.01.在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)(缺血/再灌注24h、48h、72h),模型組、電針組大鼠血清S-100β水平表達(dá)規(guī)律相似,均從缺血/再灌注24h開(kāi)始升高,缺血/再灌注48h到達(dá)峰值,

13、隨后下降,至缺血/再灌注72h仍然維持較高水平,與正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠比較,P＜0.01.電針組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清S-100β蛋白水平都較模型組低,P＜0.05,表示有顯著差異性。
　　 (8)腦含水量:正常對(duì)照組、假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)大鼠腦含水量穩(wěn)定,并保持在正常水平。模型組、電針組實(shí)驗(yàn)大鼠腦含水量在缺血再灌注后均明顯上升,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較,差異性顯著,P＜0.05甚至P＜0.01。在我們?cè)O(shè)定的觀察時(shí)間窗內(nèi)

14、(缺血/再灌注24h、48h、72h),模型組、電針組實(shí)驗(yàn)大鼠腦含水量升高規(guī)律相似,均從缺血/再灌注24h開(kāi)始升高,至缺血/再灌注48h到達(dá)峰值,隨后下降,缺血/再灌注72h腦含水量仍然維持較高水平,未恢復(fù)正常(包括電針組)。電針組大鼠腦含水量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)都較模型組低,P＜0.05,表示有顯著差異性。
　　 結(jié)論:
　　 大鼠腦缺血/再灌注后,早期電針治療介入能改善神經(jīng)功能缺失癥狀、提高腦耐缺氧能力、減少腦梗死體積、促進(jìn)