阿托伐他汀對局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生的影響.pdf

1、背景與目的：
　　缺血性腦血管病具有高發(fā)病率、高致殘率的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅人們的身體健康，給家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)，探索其發(fā)病機(jī)制成為國內(nèi)外研究熱點(diǎn)。腦細(xì)胞缺血壞死后，神經(jīng)功能的恢復(fù)很大程度上取決于血管新生情況。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶 A還原酶抑制劑（他?。┚哂忻黠@的心腦血管保護(hù)效應(yīng)，可以通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑減輕心肌缺血再灌注損傷，通過促進(jìn)血管新生和神經(jīng)再生改善缺血后神經(jīng)功能。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是內(nèi)皮細(xì)胞最具特異性的

2、生長因子，在體內(nèi)外均可誘導(dǎo)血管新生。CD105（Endoglin）作為新生血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物，常用于測定微血管密度（MVD）。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑是繼線粒體途徑和死亡受體途徑之后的一種新的細(xì)胞凋亡途徑，與多種疾病密切相關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78/Bip）是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中最主要的分子伴侶蛋白,被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志物。半胱天冬酶12（Caspase-12）是一種凋亡蛋白，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的特異性標(biāo)志物。最新報(bào)道稱減少內(nèi)

3、皮細(xì)胞凋亡可促進(jìn)血管新生，增加內(nèi)皮細(xì)胞凋亡可以抑制血管新生。那么，局灶性腦缺血后，腦組織血管新生情況如何，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑相關(guān)分子會(huì)發(fā)生什么樣的變化，阿托伐他汀的血管新生作用是不是可通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑起作用，目前尚不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)將觀察局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生情況，以及組織內(nèi)GRP78/Bip、VEGFmRNA、Caspase-12表達(dá)情況，探討阿托伐他汀對局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生的影響及相關(guān)機(jī)制，為臨床治療提供

4、理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　健康雄性SD大鼠108只，體重280±20g，隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，治療組，每組再按時(shí)間點(diǎn)分為三個(gè)亞組：1天組、3天組、7天組，每個(gè)亞組12只。采用大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）法制備永久性局灶性腦缺血模型，術(shù)后3h，治療組給予阿托伐他汀鈣片4mg/kg.d灌胃，其余兩組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給予等量生理鹽水灌胃。
　　每只大鼠分別在術(shù)后3h和處死前以Longa評(píng)分法做神經(jīng)功能缺損評(píng)分，HE染色

5、觀察組織病理學(xué)改變，免疫組化檢測CD105、GRP78/Bip蛋白，RT-PCR檢測VEGF mRNA，Western-blot檢測Caspase-12蛋白。
　　結(jié)果：
　　1. Longa神經(jīng)功能評(píng)分：假手術(shù)組大鼠未見神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，評(píng)分均為0；模型組和治療組大鼠均可見不同程度神經(jīng)功能缺損癥狀，且兩組各時(shí)間點(diǎn)處死前評(píng)分差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而術(shù)后3h評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.

6、HE染色：假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞輪廓清晰，排列整齊，胞漿豐富，淡染，細(xì)胞核大且圓，核仁清晰，細(xì)胞周圍間隙致密無水腫，無炎癥細(xì)胞浸潤；模型組梗死灶中心神經(jīng)細(xì)胞輪廓模糊，排列紊亂，數(shù)量減少，缺血梗死灶周圍有膠質(zhì)細(xì)胞增生，間質(zhì)腫脹稀疏，炎性細(xì)胞浸潤；治療組神經(jīng)細(xì)胞與模型組相比組織結(jié)構(gòu)尚清晰，間質(zhì)水腫明顯減輕，胞核與胞質(zhì)尚能分清。
　　3.免疫組化檢測CD105蛋白表達(dá)：假手術(shù)組可見少量CD105陽性細(xì)胞，模型組、治療組CD105陽性

7、細(xì)胞表達(dá)增多，而且可見少量新生血管，呈條索樣，且各時(shí)間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組、假手術(shù)組均高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨時(shí)間延長，假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)CD105表達(dá)無明顯差異，模型組和治療組CD105表達(dá)逐漸升高。
　　4.免疫組化檢測GRP78/BiP蛋白表達(dá)：假手術(shù)組GRP78/BiP弱陽性表達(dá)，模型組、治療組 GRP78/BiP表達(dá)增多，且各時(shí)間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組低、較假手術(shù)組高，且差

8、異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨時(shí)間延長，假手術(shù)組GRP78/BiP表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異，模型組和治療組GRP78/BiP表達(dá)逐漸降低。
　　5. RT-PCR檢測VEGFmRNA表達(dá)：假手術(shù)組少量表達(dá)VEGFmRNA，模型組、治療組 VEGFmRNA表達(dá)增多，且各時(shí)間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組、假手術(shù)組均高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨時(shí)間延長，假手術(shù)組 VEGFmRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異，模型組

9、和治療組 VEGFmRNA表達(dá)逐漸升高。
　　6. Western-blot檢測 Caspase-12蛋白表達(dá)：假手術(shù)組少量表達(dá)Caspase-12蛋白，模型組、治療組 Caspase-12蛋白表達(dá)增多，且各時(shí)間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組低、較假手術(shù)組高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨時(shí)間延長，假手術(shù)組 Caspase-12表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異，模型組和治療組Caspase-12表達(dá)逐漸降低。
　　7.

10、 VEGFmRNA表達(dá)和 Caspase-12蛋白表達(dá)相關(guān)分析：假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)VEGFmRNA與Caspase-12蛋白之間不存在線性相關(guān)（P>0.05），模型組、治療組各時(shí)間點(diǎn)VEGFmRNA與Caspase-12蛋白之間存在線性相關(guān)（P<0.05），且為負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.局灶性腦缺血大鼠腦組織缺血半暗帶區(qū)血管新生明顯，且阿托伐他汀可通過上調(diào)VEGFmRNA，促進(jìn)血管新生。
　　2.局灶性腦缺血大鼠腦組