腎缺血再灌注損傷與細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:探討腎缺血再灌注損傷細胞凋亡的發(fā)生機制和吡咯烷二巰基氨甲酸(PDTC)對其保護作用。
　　 方法:健康雄性wistar大鼠隨機分為3組:①缺血再灌注組(I/R組):右側(cè)腎切除加左腎動脈夾閉45分鐘建立腎缺血再灌注模型;②藥物干預(yù)組(PDTC組):缺血前30分鐘經(jīng)大鼠尾靜脈注射PDTC100mg/kg,其余步驟同I/R組;③假手術(shù)組:只麻醉開腹,鈍性分離腎包膜。分別于再灌注后不同時間點(即0h、2h、8h、24h)處死取腎。

2、檢測血清中肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,HE染色觀察腎臟病理學(xué)改變,免疫組化和Westernblot方法檢測腎組織中核因子-κB(NF-κB)、caspase-3蛋白的表達,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測腎組織勻漿中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)的含量,原位末端標記法(TUNEL)檢測腎組織細胞凋亡的變化。
　　 結(jié)果:I/R組血Cr和BUN水平明顯高于假手術(shù)組和PDTC組(p＜0.05),HE染色

3、可見腎小管上皮細胞壞死脫落,管腔擴張,腎間質(zhì)炎細胞浸潤,而PDTC組病理改變明顯減輕。I/R組NF-κB表達于再灌注后2h明顯升高且在8h達到高峰,主要表達于胞核中,再灌注后24h開始下降;iNOS、NO、caspase-3、細胞凋亡指數(shù)于再灌注后2h開始表達上調(diào),此后一直呈上升趨勢,與假手術(shù)組和PDTC組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。PDTC組上述指標,再灌注后2h時表達上調(diào),8h達到高峰,與假手術(shù)組比較均有顯著性差異(p