水飛薊素通過抑制腎組織炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡減輕腎缺血再灌注損傷.pdf

1、目的:
　　腎缺血再灌注損傷（renal ischemic reperfusion injury，renal I/R）是臨床上不可避免的病理過程及治療難題，常發(fā)生于需要阻斷腎臟血供手術(shù)過程，如腎外傷、腎腫瘤腎部分切除、腎移植，導(dǎo)致腎臟急性功能衰竭及移植腎急性排斥反應(yīng)、抑制腎功能恢復(fù)延遲、慢性排斥反應(yīng)和纖維化。因此如何有效減輕腎缺血再灌注損傷是臨床上急需解決的問題。水飛薊素（Silymarin）是一種抗氧化活性物，臨床上已廣泛應(yīng)用于

2、治療各種病因引起的肝臟疾病。前期研究表明，水飛薊素具有抗腫瘤、抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的作用。因此，水飛薊素能否抑制腎缺血再灌注過程中的炎癥反應(yīng)、減輕腎損傷保護(hù)腎功能？本實(shí)驗(yàn)旨在研究水飛薊素對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　第一部分：設(shè)計(jì)一種簡單穩(wěn)定的小鼠腎缺血再灌注模型，分別檢測假手術(shù)組和I/R組小鼠血清肌酐及尿素氮水平，PAS染色觀察各組小鼠腎病理損傷；將小鼠按缺血時(shí)間分為5組：0 min

3、、20 min、30 min、40 min、50 min，分別檢測48小時(shí)后各組小鼠生存率。
　　第二部分：檢測水飛薊素（Silymarin）對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，將小鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（Sham組）、乙醇+I/R組、水飛薊素+I/R組，檢測各組小鼠術(shù)后10天生存率，檢測各組小鼠血清肌酐及尿素氮水平，PAS染色檢測各組小鼠腎組織病理損傷，檢測各組小鼠腎組織髓過氧化物酶活性，免疫熒光檢測各組小鼠腎組織CD68表達(dá)，

4、ELISA及RT-PCR檢測各組小鼠腎組織TNF-α、IL-1β和IL-6合成及分泌水平，TUNEL檢測各組小鼠腎細(xì)胞凋亡數(shù)， Western blot檢測各組小鼠腎組織Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　第一部分：小鼠腎缺血再灌注損傷后假手術(shù)組血清肌酐及尿素氮分別為（4.5±2.32 mg/L、296.1±36.03 mg/L），實(shí)驗(yàn)組分別為（28±9.14 mg/L、123

5、8±363.9 mg/L），腎組織切片PAS染色觀察顯示實(shí)驗(yàn)組腎組織廣泛壞死，各組小鼠48小鼠生存率分別為90％（20 min）、80%（30 min）、70%（40 min）、50 min缺血時(shí)間小鼠24小時(shí)內(nèi)全部死亡。
　　第二部分：乙醇+I/R組小鼠術(shù)后3天全部死亡，而水飛薊素+I/R組10天生存率為90%。假手術(shù)組小鼠肌酐及尿素氮水平分別為（4.1±1.15 mg/L）和（271.2±18.1 mg/L）；乙醇+I/R組小

6、鼠肌酐及尿素氮分別為（21.5±3.8 mg/L）和（1127.2±613 mg/L），而水飛薊素+I/R組小鼠分別為（12.9±2.41 mg/L）和（581±43.1 mg/L），術(shù)后第3天、第7天分別為（9.1±1.76 mg/L）和（6.5±1.3 mg/L）、（411±37.8 mg/L）和（237±24.3 mg/L）。各組腎臟半定量損傷評分分別為水飛薊素+I/R組（1.8±0.37）較乙醇+I/R組小鼠（4.6±0.24）

7、明顯減低；MPO檢測結(jié)果水飛薊素+I/R組小鼠及乙醇+I/R組分別為(21.2±8.4)U/g和（53.2±7.6）U/g；CD68細(xì)胞浸潤數(shù)分別為乙醇+I/R組小鼠（11.4±2.3）及水飛薊素（5.6±1.8）；水飛薊素+I/R組炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）合成水平均較乙醇+I/R組下降；乙醇+I/R組及水飛薊素+I/R組細(xì)胞凋亡數(shù)分別為（47.67±2.4）和（27.67±3.56）。水飛薊素+I/R組Bax（0.

8、605±0.119）及Cleaved-caspase3（0.364±0.119）較乙醇+I/R組下降（0.832±0.158）和（0.865±0.142）降低，而Bcl-2(1.533±0.615)比乙醇組（0.145±0.089）增加。
　　結(jié)論:
　　腎缺血再灌注損傷時(shí)腎臟組織損傷程度與缺血時(shí)間成正比；水飛薊素能夠提高致死型小鼠腎缺血再灌注損傷模型小鼠的生存率，減少腎缺血再灌注損傷時(shí)腎臟組織損傷及保護(hù)腎功能；抑制腎缺血再