腎缺血再灌注損傷模型小鼠炎性反應信號相關研究.pdf

1、目的：觀察小鼠腎臟缺血再灌注后，各個時間組血清中炎性細胞因子白細胞介素-1、腫瘤壞死因子-a、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子、白細胞介素-6含量和腎臟組織中TLR4 mRNA、TNF-a mRNA、IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的水平變化，并初步探討 TLR4與各炎性因子信號在 RIRI過程中的作用及相關機制。
　　方法：建立小鼠腎缺血再灌注損傷模型(使健康雄性 C57BL/6小鼠雙側腎臟血供中斷45分鐘

2、，松開夾子使雙腎血流重新灌注)。設立正常對照(N)組、假手術(S)組、腎缺血再灌注I/R4 h組、I/R12 h組、I/R24 h組,(S)組除不中斷血供，其余操作均同手術組。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測各實驗組血清中 IL-1、TNF-a、GM-CSF、IL-6的變化。實時熒光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,QRT-PCR)法分別檢查各實驗組小鼠腎臟組織中TLR4 mRNA、TNF mR

3、NA、IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的表達變化。
　　結果：
　　1.與正常對照組相比較，腎缺血再灌注I/R4h組、I/R12h組、I/R24 h組血清中 IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF濃度均增高，且各指標的變化趨勢基本相似，都在I/R12h組升高最顯著，之后逐漸下降，差別有統(tǒng)計學意義。
　　2.與正常對照相比較，腎臟組織中 TLR4 mRNA、IL-1a mRNA、IL-6

4、 mRNA和 CSF2 mRNA水平均明顯增高，差別有統(tǒng)計學意義，且TLR4 mRNA與各炎性信號呈現(xiàn)相似的變化趨勢，均于 I/R12h達到高峰TNF-a水平無顯著變化。和(N)組比較，(S)組血清和腎臟組織中各因子含量均沒有特別變化。分別進行TLR4 mRNA與IL-1amRNA、IL-6mRNA和CSF2mRNA的線性相關分析，結果顯示TLR4 mRNA與IL-1amRNA呈顯著正相關；TLR4 mRNA與IL-6mRNA呈顯著正相

5、關；TLR4 mRNA與CSF2 mRNA呈顯著正相關；本研究尚未發(fā)現(xiàn)TLR4 mRNA與TNF-amRNA有相關性。
　　結論：
　　1.與對照組比較，I/R4h組、I/R12h組、I/R24h組血清中TNF-a、IL-1、IL-6、GM-CSF水平升高，12h組升高顯著，說明在腎缺血再灌注損傷情況下，TNFa、IL-1、 IL-6、GM-CSF參與早期腎臟損傷的發(fā)病過程。
　　2.缺血再灌注后腎組織TLR4mRNA

6、的表達水平和IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和 CSF2 mRNA的表達水平均高于正常對照組，且增高趨勢與這幾個炎性信號變化一致，均于12h增高最顯著，隨著再灌注時間延長，表達水平又下降。相關分析表明，缺血再灌注后腎臟組織中 TLR4 mRNA的表達水平與 IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的表達水平有強相關性，提示Toll樣受體可能通過介導炎性反應信號通路參與了腎臟缺血再灌注腎臟的損傷過程，在腎缺血再