小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型建立及促紅細(xì)胞生成素通過HO-1對小鼠腎臟缺血再灌注損傷保護(hù).pdf

1、目的：急性腎功能衰竭(ARF)是一種常見且嚴(yán)重的臨床綜合征，預(yù)后不良且療效差強(qiáng)人意。近年在臨床研究中發(fā)現(xiàn)抗氧化治療能成功的防治ARF：動物實(shí)驗(yàn)中針對HO、NOS、PPARs系統(tǒng)及抗炎抗氧化應(yīng)激等途徑也進(jìn)行了大量有益的探索。這為有效干預(yù)缺血性ARF提供了新的思路。本實(shí)驗(yàn)旨在探討建立穩(wěn)定的、適合的小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型并評估缺血模型的影響因素，在此基礎(chǔ)上觀察重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)對小鼠腎臟缺血再灌注損傷(IR）血紅素加氧酶-

2、1（HO-1） mRNA表達(dá)的影響，以探討rhEPO對IR的保護(hù)作用。
　　 方法：應(yīng)用無損傷動脈夾夾閉小鼠單側(cè)腎蒂制備急性單腎缺血-再灌注腎損傷模型, 于術(shù)后24h后處死觀察腎功能及腎臟病理變化。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步根據(jù)缺血時(shí)間、手術(shù)時(shí)體溫的控制、飲食情況進(jìn)行分組，進(jìn)行單腎缺血再灌注，于術(shù)后24h后處死觀察腎功能及腎臟病理變化。確定好實(shí)驗(yàn)條件后將28只雄性C57BL/6N小鼠隨機(jī)分為四組：假手術(shù)組（n=7）、腎IR組（n=7）、r

3、hEPO+Sham組（n=7）及rhEPO+IR組（n=7），并在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行腎功能檢測（血肌酐）、PAS染色評估腎組織形態(tài)學(xué)變化情況以及TUNEL染色分析和比較各組凋亡細(xì)胞數(shù)量的變化，Real-time PCR檢測腎臟組織中血紅素氧化酶-1（HO-1）、白細(xì)胞介素6（IL-6）mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：造模成功率均達(dá)87.5％以上;術(shù)后24h實(shí)驗(yàn)組血清肌酐(Scr)水平明顯升高。在缺血時(shí)間分析中：與Sham組相比，隨著缺血

4、時(shí)間的延長，Scr程度加重，且腎組織形態(tài)學(xué)改變加重。但缺血25min和缺血30min無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在手術(shù)溫度結(jié)果分析中：與Sham組相比，常溫IRI組小鼠發(fā)生中等程度腎損傷，其Scr升高，腎組織形態(tài)學(xué)改變。高溫明顯加重小鼠的IRI損傷(P<0．05)，輕度低溫對小鼠IRI具有保護(hù)作用。飲食結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)：是否禁食不能影響IRI結(jié)果。rhEPO對于腎缺血再灌注損傷的保護(hù)實(shí)驗(yàn)中納入動物28只，均進(jìn)入結(jié)果分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，①重組人促紅細(xì)胞生

5、成素干預(yù)組腎組織中HO-1 mRNA表達(dá)水平與腎缺血再灌注損傷組相比顯著升高而IL-6 mRNA水平則降低（P<0.05）。②重組人促紅細(xì)胞生成素干預(yù)組血肌酐含量與腎缺血再灌注損傷組相比降低（P<0.05）。③重組人促紅細(xì)胞生成素干預(yù)組腎臟病變與腎缺血再灌注組比較明顯減輕，大片壞死區(qū)明顯減少，僅見局灶性小管壞死，很少見管型和壞死細(xì)胞，間質(zhì)充血、出血明顯減輕。④TUNEL染色示，與假手術(shù)組相比，IR組凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增多（P<0.05），