促紅細胞生成素預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：研究促紅細胞生成素（EPO）預處理在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護作用與機制。
　　 方法：84只雄性SD大鼠隨機分為3組：即正常組、缺血再灌注組（IR組）、EPO處理組（EP組）。EP組大鼠建立模型前24h腹腔注射促紅細胞生成素5000U/kg做藥物預處理，IR組建立模型前24h腹腔注射1ml生理鹽水。心臟停搏后置于4℃St.ThomasⅡ號停搏液中分別保存4h、6h、8h（各時間位點均為心臟6只），保存結(jié)束后制備活鼠替

2、代Langendorff模型的灌注心臟模型。測定各組心臟保存前及保存后再灌注60min的血流動力學（HR、CF、LVDP、LVEDP、±dp/dtmax）等心功能指標，心肌酶（LDH、CK、CK-MB）釋放量，心肌含水量。實驗結(jié)束分別取各組左心室心肌標本，觀察心肌常規(guī)和超微組織結(jié)構(gòu)的變化。采用缺口末端標記（TUNEL）技術(shù)檢測各組心肌細胞凋亡率。Western blot檢測心肌組織中Caspase-3蛋白表達水平。
　　 結(jié)果：

3、（1）心臟保存4h、6h、8h后再平衡灌注60min，EP組的心臟血流動力學及心功能各項指標恢復明顯優(yōu)于IR組（P<0.05或P<0.01）。（2）隨著保存延長，各組血清CK、CK-MB及LDH水平逐漸升高。在各時間點CK、CK-MB和LDH水平，IR組高于EP組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。（3）心臟保存8h，盡管實驗組心功能各項指標有明顯下降，但心臟仍全部復跳，IR組有3只心臟不能復跳。（4）TUNEL法檢測結(jié)果

4、顯示：IR組及EP組凋亡指數(shù)均高于正常組，EP組心肌細胞凋亡數(shù)明顯低于IR組。（5）Western blot檢測結(jié)果顯示：各組Caspase-3蛋白均有所表達，EP組Caspase-3蛋白表達量低于IR組（P<0.05），表達明顯受到抑制。（6）光鏡顯示正常組心肌纖維排列規(guī)則，細胞核結(jié)構(gòu)完整，為正常心肌組織結(jié)構(gòu)。IR組心肌纖維排列紊亂，細胞核不規(guī)則，胞漿著色深，間質(zhì)明顯水腫，有炎癥細胞浸潤。EP組心肌組織損傷相對較輕，心肌纖維排列較規(guī)整

5、，間質(zhì)水腫不明顯，間質(zhì)內(nèi)可見少量炎癥細胞浸潤。EP組及IR組光學顯微鏡下心肌組織均表現(xiàn)為不同程度的心肌空泡變性，伴有灶性心肌損害，炎性細胞浸潤。隨著保存時間的延長，衰變越明顯。心臟保存8h后，IR組表現(xiàn)為彌漫性多類型細胞浸潤，伴有明顯的水腫、出血和心肌壞死，EP組較對照組明顯減輕。（7）透射電鏡顯示空白組心肌細胞結(jié)構(gòu)基本正常，肌原纖維平行排列，肌節(jié)清晰，線粒體形態(tài)一致，呈橢圓形，細胞核結(jié)構(gòu)正常，而IR組和EP組均可見肌原纖維排列紊亂、斷

6、裂，線粒體腫脹或固縮，嵴溶解，部分線粒體空化。細胞核內(nèi)染色質(zhì)邊集，細胞質(zhì)水腫明顯。EP組細胞結(jié)構(gòu)損傷較輕，可見肌原纖維排列較規(guī)則，無明顯溶解、斷裂，線粒體形態(tài)接近正常，核內(nèi)核仁清楚。
　　 結(jié)論：1、EPO預處理可以促進保存心臟心功能恢復，顯著增強心肌收縮能力，改善順應(yīng)性。2、EPO預處理可以減輕心肌水腫、充血及滲出，血管擴張及炎癥細胞浸潤，減少細胞凋亡和Caspase-3基因表達，提高心臟保存質(zhì)量，明顯減輕心肌細胞缺血再灌注損