重組人促紅細(xì)胞生成素模擬缺血預(yù)適應(yīng)改善大鼠腸系膜缺血再灌注損傷.pdf

1、背景： 1960年，Jenings首先提出缺血再灌注損傷的概念，發(fā)現(xiàn)許多組織、器官缺血后恢復(fù)血液再灌注，其功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷進(jìn)一步加重，這種現(xiàn)象即為缺血再灌注損傷。機(jī)體內(nèi)許多組織器官，如心、腦、肝、腎、胃腸、肢體等都可發(fā)生缺血再灌注損傷。 小腸是對缺血缺氧極其敏感的器官之一。腸系膜缺血再灌注事件在嚴(yán)重創(chuàng)傷、失血性休克、感染性休克、腸系膜動脈栓塞和血栓形成、腸系膜靜脈血栓形成、腸絞窄、腹主動脈瘤修補(bǔ)以及小腸移植等臨床情況中

2、有重要的意義。近年研究還發(fā)現(xiàn)，在CO2氣腹造成的高腹壓狀態(tài)下，小腸有缺血再灌注樣損傷；小腸的缺血再灌注損傷還影響小腸及結(jié)腸吻合口的愈合；腸系膜缺血再灌注還促進(jìn)術(shù)后腸粘連的發(fā)生，而術(shù)后腸粘連是腸梗阻的首要病因。腸系膜缺血再灌注事件對小腸的局部損傷表現(xiàn)為腸功能衰竭：腸動力障礙、腸消化吸收功能障礙及腸屏障功能障礙，進(jìn)而可導(dǎo)致腸道菌群移位和內(nèi)毒素血癥，腸源性炎癥介質(zhì)釋放，放大炎癥瀑布反應(yīng)，誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征，損傷肝、肺、腎等遠(yuǎn)處器官，最終可

3、導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征和多臟器衰竭，而腸系膜缺血再灌注事件是MOF發(fā)生發(fā)展過程中的樞紐和始動環(huán)節(jié)。因此，腸缺血再灌注事件損傷機(jī)制及防治策略的研究有著重要的臨床意義。 1986年，Murry等首先提出了缺血預(yù)適應(yīng)(Ischemia Preconditioning，IPC)的概念，即短期缺血應(yīng)激能使組織器官對隨后更長時間缺血再灌注損傷產(chǎn)生明顯的保護(hù)作用。之后進(jìn)行的體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)，心、腦、腎等容易發(fā)生缺血缺氧損傷的器官普遍

4、存在IPC現(xiàn)象。IPC是機(jī)體對于缺血缺氧而產(chǎn)生的一種內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，同時又能作為一種干預(yù)手段而減輕缺血再灌注損傷。IPC對于心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的有益作用已較為肯定，對其保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制也有了較深的認(rèn)識和了解，特別是在心肌缺血再灌注損傷的研究中，已有不少實(shí)驗(yàn)證實(shí)了一些介導(dǎo)IPC效應(yīng)的內(nèi)源性保護(hù)因素，NO、腺苷、內(nèi)源性阿片樣肽等物質(zhì)在不同器官缺血再灌注損傷的動物模型中表現(xiàn)出模擬IPC的效應(yīng)。IPC的機(jī)制十分復(fù)雜，尚未完全闡明，以往對IPC在小

5、腸缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究不多，IPC對小腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用尚未完全確立。 近年來，促紅細(xì)胞生成素的非造血生物活性成為研究的熱點(diǎn)。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，EPO是一種糖蛋白造血細(xì)胞生長因子，主要由腎臟合成和分泌，具有促進(jìn)紅系干細(xì)胞增殖、分化、成熟，促進(jìn)網(wǎng)織紅細(xì)胞釋放入血的生物學(xué)作用。重組人促紅rHuEPO問世以來，臨床上廣泛應(yīng)用于腎性貧血、惡性腫瘤患者放化療導(dǎo)致的貧血并取得了良好的療效。EPO對心肌、腦、腎等器官缺血再灌注

6、損傷的保護(hù)作用逐漸受到關(guān)注，這些研究表明，EPO可能具有抗炎、抗氧化等組織保護(hù)作用。然而，目前EPO對腸缺血再灌注損傷的效應(yīng)尚未明確。 目的： 1．利用大鼠IPC模型觀察IPC在小腸缺血再灌注損傷中的作用，并對其效應(yīng)機(jī)制進(jìn)行初步的探討。 2．利用大鼠腸系膜缺血再灌注損傷模型，觀察給予rHuEPO對小腸缺血再灌注損傷的影響，并探討介導(dǎo)其效應(yīng)的機(jī)制。 方法： 1．采用腸系膜上動脈無創(chuàng)性暫時阻斷30mi

7、n，之后恢復(fù)腸系膜血流再灌注60min的方法構(gòu)建大鼠腸系膜缺血再灌注損傷模型，采用2周期的5min缺血/5min再灌注建立大鼠腸系膜IPC模型。 2．心室穿刺取血制備血清樣本，以四乙氧基丙烷作為標(biāo)準(zhǔn)品，通過硫代巴比妥酸反應(yīng)方法來測定血清丙二醛含量，評價缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平。 3．取大鼠遠(yuǎn)端回腸制備腸組織勻漿樣本，比色法測定樣本髓過氧化物酶活性，評價缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)程度。 4．大鼠遠(yuǎn)端回腸

8、組織切片，蘇木素-伊紅染色，采用Park/Chiu對腸組織損傷程度進(jìn)行組織病理學(xué)評分；TUNEL法測定腸粘膜凋亡細(xì)胞數(shù)。 5．采用Western blot方法檢測大鼠遠(yuǎn)端回腸組織樣本Bcl-2表達(dá)。 結(jié)論： 1．預(yù)適應(yīng)性缺血減輕大鼠腸系膜缺血再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，減輕腸組織中性粒細(xì)胞積聚，抑制腸粘膜細(xì)胞凋亡，KATP通道阻滯劑阻斷預(yù)適應(yīng)性缺血的保護(hù)效應(yīng)，因此推測IPC的腸組織保護(hù)效應(yīng)與KATP通道有關(guān)。