促紅細胞生成素預處理對兔肺缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:研究促紅細胞生成素(EPO)預處理對兔離體肺缺血再灌注損傷保護作用并探討其在缺血再灌注損傷過程中對肺保護的作用機制,從而為臨床肺保護提供實驗依據(jù)。
　　 方法:采用離體兔肺缺血再灌注損傷模型,將48只健康新西蘭大白兔隨機分成3組,即對照組(Control group,C組)、缺血再灌注組(Ischemia-reprefusion group,IR組)及EPO預處理組(Erythropoietin preconditioni

2、ng group,EP組),每組16只。C組開胸后未給予缺血處理,直接同種異體血灌注2h。EP組、IR組24h前經(jīng)靜脈分別注射給予5000u/kg EPO及等量的生理鹽水進行預處理,用4℃低鉀右旋糖苷(LPD)液灌洗和保存肺,在4℃條件下保存6h。6h后以同種異體兔血再灌注2h。各組分別與缺血后1h(T1)、再灌注時(T2)、再灌注后1h(T3)、2h(T4)留取肺組織標本待檢。檢測指標:
　　 1.TUNEL法檢測肺細胞的凋亡

3、情況。
　　 2.烘干法檢測肺濕/干重比(W/D)。
　　 3.檢測肺組織中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。
　　 4.免疫組織化學法檢測肺組織中caspase-3蛋白表達。
　　 5.分別用光鏡及透視電鏡觀察肺組織病理形態(tài)學及超微結構變化。
　　 結果:
　　 1.TUNEL檢測結果示:再灌注后IR組、EP組細胞凋亡指數(shù)較C組增高(p<0.05或p<0.01),但EP

4、組細胞AI與IR組相比明顯下降(p<0.05)。
　　 2.與C組相比,剛開始灌注時IR組、EP組肺組織W/D值無統(tǒng)計學意義(p>0.05),再灌注后,IR組、EP組肺組織W/D值升高(p<0.05或p<0.01)；與IR組相比,EP組肺組織W/D值下降(p<0.05或p<0.01)。
　　 3.與C組相比,在剛開始灌注時及再灌注后,IR組肺組織中的MDA含量升高(p<0.05或p<0.01)；EP組再灌注后,肺組織MD

5、A含量升高(p<0.05或p<0.01)；但與IR相比,EP組肺組織MDA含量降低(p<0.05或p<0.01)。與C組相比,剛開始灌注及再灌注后,IR組肺組織SOD活力降低(p<0.05或p<0.01),EP組再灌注后SOD活力降低(p<0.05)；但與IR相比,肺組織SOD活力升高(p<0.05)。
　　 4.肺組織中caspase-3表達,剛開始灌注時,IR組與C組相比升高(p<0.05)；再灌注后,IR組、EP組顯著增高

6、(p<0.01或p<0.05)；2h后,EP組與IR組相比降低(p<0.05)。光鏡下示:對照組僅有很少量的棕黃色陽性產(chǎn)物,IR組及EP組發(fā)現(xiàn)大量的棕黃色陽性產(chǎn)物,但EP組較IR組明顯較少。
　　 5.光鏡下:C組肺泡細胞結構基本正常；IR組肺組織出現(xiàn)彌漫改變,肺泡細胞腫脹,肺泡間質水腫、充血及炎癥反應明顯,肺毛細血管擴張、充血及白細胞聚集；EP組肺組織細胞損傷較IR組明顯減輕,肺泡腔內(nèi)滲出明顯減少,白細胞聚集減少。透視電鏡下:

7、C組Ⅰ型、Ⅱ型肺泡細胞及血管內(nèi)皮細胞結構基本正常；IR組Ⅰ型肺泡細胞扁平,基底膜.增厚,胞漿出現(xiàn)空泡；Ⅱ型肺泡細胞微絨毛減少,線粒體腫脹,線粒體嵴減少,嗜鋨性板層小體減少；內(nèi)皮細胞腫脹,基底膜增厚,細胞間隙增寬,染色質聚集,核變性壞死。EP組Ⅰ型及Ⅱ型肺泡細胞結構基本正常,核染色質邊集,線粒體呈圓形或橢圓形,嵴清楚,微絨毛及板層小體結構未見明顯改變,少數(shù)線粒體可出現(xiàn)腫脹,內(nèi)皮細胞輕度腫脹,基底膜基本正常。
　　 結論: