ARB對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷早期炎性反應(yīng)的影響.pdf

1、背景：腦卒中是最常見(jiàn)的腦血管疾病，其發(fā)病率和致死率都很高。近期的研究表明，腦內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS))與腦缺血的關(guān)系密切，阻滯RAS對(duì)預(yù)防腦卒中有重要作用。研究證實(shí)，血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)參與缺血性腦損害的病理過(guò)程，血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(ARB)具有獨(dú)立于降壓以外的腦保護(hù)作用，阻斷血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1)可減輕腦缺血再灌注損傷。目前，關(guān)于ARB對(duì)腦缺血/再灌注損傷早期炎性反應(yīng)影響的相關(guān)文獻(xiàn)甚少。
　　 目的：通

2、過(guò)阻斷大腦中動(dòng)脈阻塞模型(MCAO)模型小鼠的AT1受體，以探討ARB對(duì)腦缺血再灌注損傷早期炎性反應(yīng)的影響、腦保護(hù)作用并分析其機(jī)制。
　　 方法：⑴建立小鼠MCAO模型。在C57BL/6J系小鼠上建立大腦中動(dòng)脈阻塞模型，缺血1h/再灌注11h，采用氯化三苯基四氮唑染色(TTC)染色觀察腦梗塞面積，確定小鼠MCAO模型成功。⑵觀察AT1受體阻斷劑-替米沙坦預(yù)處理對(duì)小鼠MCAO缺血再灌注損傷模型預(yù)后的影響。選用8w齡C57BL/6J

3、系小鼠30只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3組，三組采用相同辦法復(fù)制MACO模型。其中對(duì)照組，不進(jìn)行ARB預(yù)干預(yù)，缺血1h/再灌注11h；缺血-1組為缺血1h/再灌注6h；缺血-2組為缺血1h/再灌注11h。缺血組給予小鼠替米沙坦0.3mg/(kg.d)灌胃，給藥時(shí)間8周，對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃，普通飼料喂養(yǎng)。各組均于8周后建立腦缺血/再灌注損傷模型。采用尾袖法在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)動(dòng)物血壓。缺血1h，分別再灌注6h、11h后處死動(dòng)物，取腦

4、組織置于腦切片模具內(nèi)，由前至后冠狀面2mm間隔切取組織片7片，切片厚度5μm。觀察動(dòng)物死亡率、神經(jīng)功能缺陷評(píng)分、腦組織含水量的改變以及梗塞面積的測(cè)定。記錄三組小鼠缺血再灌注前后肝腎功能結(jié)果。⑶免疫組化染色切片，切片均取自冠狀切片第3、4切片，在光學(xué)顯微鏡下選取梗塞周邊區(qū)皮層5個(gè)不重復(fù)部位的高倍(40×10)視野，進(jìn)行IL-1β、TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，同時(shí)計(jì)數(shù)對(duì)側(cè)相應(yīng)區(qū)域5個(gè)不重復(fù)部位的高倍(40×10)視野。
　　 結(jié)果：①小

5、鼠MCAO模型TTC染色后梗塞組織呈白色，缺血再灌注中心區(qū)位于紋狀體外側(cè)和額頂葉皮質(zhì)，與MCA支配的腦區(qū)域一致，未缺血部分呈紅色為正常腦組織，缺血半暗區(qū)位于紋狀體外側(cè)和額頂葉皮質(zhì)上部，表明MCAO模型制作成功。②替米沙坦預(yù)處理組對(duì)MACO小鼠腦缺血再灌注后肝腎功能、動(dòng)物血壓、梗塞面積無(wú)明顯影響；與對(duì)照組比較，腦組織含水量明顯減少，神經(jīng)學(xué)評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組；動(dòng)物死亡率明顯低于對(duì)照組。上述結(jié)果綜合說(shuō)明缺血再灌注損傷發(fā)生后，應(yīng)用替米沙坦預(yù)處理

6、能明顯改善缺血再灌注損傷程度，并改善其預(yù)后。③缺血對(duì)側(cè)半球有少量的TNF-α、IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，均較恒定，各組間無(wú)明顯差異。TNF-α、IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)分布區(qū)域以缺血周圍區(qū)的皮質(zhì)最多，TNF-α、IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量較非缺血區(qū)有明顯的增加，有顯著性差異；與對(duì)照組相比，缺血1組、缺血2組表達(dá)量較少，有顯著性差異；缺血1組、缺血2組之間表達(dá)相似，兩者無(wú)顯著性差異；缺血半暗區(qū)IL-1β、TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量較非缺血區(qū)有