補(bǔ)體分子在小鼠腦缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、目的:觀察補(bǔ)體在小鼠腦缺血-再灌注損傷過程中的表達(dá)和沉積變化情況,探討其在腦缺血-再灌注損傷中的意義。
　　方法:72只健康雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常組、缺血再灌注6h、24h、48h、72h、96h,每組均為12只;48只健康昆明小鼠,隨機(jī)分為正常組、缺血再灌注6h、24h、48h、72h、96h,每組均為8只;眼鏡蛇毒因子(CVF)治療組、PBS組、正常組,每組6只。采用線栓法制備小鼠大腦中動脈閉塞(MCAO)模型,缺

2、血1h后再灌注。記錄小鼠大腦神經(jīng)功能缺失程度、腦組織病理的動態(tài)變化、腦組織梗死面積,應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)法及熒光定量PCR法檢測腦內(nèi)補(bǔ)體成分的沉積和表達(dá)。
　　結(jié)果:局灶性腦缺血-再灌注后神經(jīng)功能缺失評分最高出現(xiàn)在再灌注后24h,腦組織病理損傷在再灌注后24h達(dá)最重,腦組織冠狀切片TTC染色后于再灌注24h缺血損傷體積最大,腦內(nèi)補(bǔ)體分子C3d、C4d、C5b-9、MBL-A隨著再灌注時間的延長沉積逐漸增高,至24h達(dá)最高,48h以

3、后沉積逐漸減少,CVF治療組,相比PBS組,再灌注24h時神經(jīng)功能缺損評分明顯降低,腦組織病理損傷和TTC染色腦組織梗死體積顯著減輕。數(shù)據(jù)表明,補(bǔ)體分子的激活參與了腦組織損傷。相反,補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59、CD46的表達(dá)水平逐漸減少,至再灌注后24h達(dá)最低,再灌注96h基本恢復(fù)正常,補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59、CD46表達(dá)水平與腦組織損傷、神經(jīng)功能缺損評分和補(bǔ)體分子的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。提示:當(dāng)腦缺血再灌注損傷逐漸加重時,損傷區(qū)補(bǔ)體分子的沉積也逐漸

4、增多,當(dāng)損傷減輕時,補(bǔ)體分子的沉積則相應(yīng)減少;由于補(bǔ)體系統(tǒng)激活同時也會損傷正常組織,作為體內(nèi)能夠調(diào)節(jié)補(bǔ)體分子激活使正常組織免遭損傷的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白,在損傷逐漸加重時其表達(dá)量卻逐漸減少,當(dāng)損傷減輕時表達(dá)量則又逐漸恢復(fù),說明在腦缺血再灌注損傷中有補(bǔ)體系統(tǒng)參與。
　　結(jié)論:腦缺血-再灌注后補(bǔ)體分子大量激活,參與了腦組織損傷的全過程,并與腦組織損傷程度密切相關(guān),通過調(diào)節(jié)和損傷密切相關(guān)的重要補(bǔ)體分子的表達(dá)和沉積可為治療腦缺血-再灌注損傷提供新