星形膠質(zhì)細(xì)胞在高血糖腦缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的：高血糖能夠加重腦缺血再灌注神經(jīng)元損傷，但對(duì)于星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響尚不清楚。本研究以高血糖全腦缺血再灌注大鼠為模型，探討高血糖腦缺血再灌注損傷中星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用及分子機(jī)制。
　　方法：雄性SD大鼠隨機(jī)分為：糖尿病高血糖假手術(shù)對(duì)照組（簡稱假手術(shù)組），正常血糖腦缺血再灌注組（簡稱正常血糖組），糖尿病高血糖腦缺血再灌注組（簡稱高血糖組）。采用鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)制備Ⅰ型糖尿病大鼠模型，通過雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾

2、閉和股動(dòng)脈放血法，建立大鼠全腦缺血15min,再灌注3h、6h模型。分別進(jìn)行病理組織學(xué)觀察、原位末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)標(biāo)記法(TUNEL)、免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)記法、蛋白印跡(Westernblot)法等技術(shù),對(duì)比觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡及其磷酸化MEK1/2、磷酸化ERK1/2及CleavedCaspase-3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：組織學(xué)檢查可見，高血糖組腦缺血再灌注6h,神經(jīng)元腫脹，出現(xiàn)明顯腦水腫

3、。TUNEL雙標(biāo)記在假手術(shù)組未發(fā)現(xiàn)陽性神經(jīng)細(xì)胞；高血糖組腦缺血再灌注3h，海馬CA1區(qū)TUNEL陽性神經(jīng)細(xì)胞明顯多于正常血糖組（P<0.05）。通過GFAP和TUNEL熒光免疫組化雙標(biāo)記可見，在正常血糖組腦缺血再灌注3h和6h，海馬CA1區(qū)和扣帶皮質(zhì)區(qū),偶見TUNEL陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞，高血糖組腦缺血再灌注6h，海馬CA1區(qū)TUNEL陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯多于正常血糖組（P<0.05）。CleavedCaspase-3免疫標(biāo)記可見，

4、在高血糖組和正常血糖組，海馬CA1區(qū)及扣帶皮質(zhì)區(qū)可見陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞，高血糖組腦缺血再灌注3h和6h，CleavedCaspase-3陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量多于正常血糖組（P<0.05）。WesternBlot結(jié)果顯示，高血糖組腦缺血再灌3h和6h，海馬組織中cleavedCaspase-3的相對(duì)灰度值增高，與正常血糖組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP蛋白的表達(dá)可見，與正常血糖組比較，高血糖組在海馬CA1區(qū)及扣帶皮

5、層可以見到星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體變大,突起多而粗大。P-MEK1/2免疫雙標(biāo)記可見，在正常血糖組和高血糖組可見P-MEK1/2陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞；高血糖組缺血再灌注3h、6h，海馬CA1區(qū)陽性膠質(zhì)細(xì)胞多于正常血糖組（P<0.05）；高血糖組扣帶皮質(zhì)區(qū)陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞在缺血再灌注3h與正常血糖組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。WesternBlot顯示，高血糖組腦缺血再灌3h和6h，海馬組織P-MEK1/2相對(duì)灰度值（分別為2.087±0.1

6、47、1.780±0.091）明顯高于正常血糖組（P<0.05）。磷酸化ERK1/2在假手術(shù)組未發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞，海馬CA1區(qū)及扣帶皮質(zhì)區(qū)高血糖組腦缺血再灌注3h陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯多于正常血糖組（P<0.05）。WesternBlot結(jié)果顯示，高血糖組腦缺血再灌注3h和6h，海馬組織P-ERK1/2相對(duì)灰度值高于正常血糖組（P<0.05）。
　　結(jié)論：糖尿病高血糖條件下，腦缺血再灌注3小時(shí)能夠增加實(shí)驗(yàn)大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡。高