大鼠局灶腦缺血-再灌注后星形膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)及星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥介質(zhì)的表達(dá).pdf

1、腦血管病是人類的常見病和多發(fā)病，其以較高的發(fā)病率、致殘率和病死率成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅人類健康的一類重要疾病，其中以缺血性腦血管病為最常見，但由于缺血后原發(fā)性和繼發(fā)性損傷機(jī)制尚未完全明了，所以它一直是各國(guó)研究的重點(diǎn)和難題。目前，對(duì)于腦缺血/再灌注損傷機(jī)制的研究主要集中在氧自由基、興奮性氨基酸、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、線粒體損傷、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等方面，其中，再灌注時(shí)的炎癥反應(yīng)促進(jìn)了繼發(fā)性腦損傷，是腦缺血/再灌注損傷的主要原因之一。 腦缺血后星

2、形膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)第一類受損的細(xì)胞，出現(xiàn)肥大、增殖，并合成表達(dá)多種炎癥介質(zhì)(如NF一κB p65、TNF-α、ICAM-1)，啟動(dòng)了免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng)?？寡趸瘎┻量┩槎蚧姿狨?pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)能夠通過選擇性抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性，從而減少因免疫或炎癥反應(yīng)所導(dǎo)致的組織損傷。因此，本課題采用PDTC作為干預(yù)手段，了解星形膠質(zhì)細(xì)胞及其表達(dá)的炎癥介質(zhì)，對(duì)尋找減輕腦缺血后炎癥反應(yīng)損傷的

3、新途徑具有重要意義，值得進(jìn)一步地探索。 目的： (1)探討Wistar大鼠局灶腦缺血/再灌注后反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦組織中的形態(tài)、數(shù)量的時(shí)空變化； (2)研究大鼠腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)NF-κB p65、TNF-α、ICAM-1的時(shí)空規(guī)律，探討星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)炎癥介質(zhì)在局灶腦缺血/再灌注中的作用機(jī)制； (3)進(jìn)一步評(píng)估不同劑量抗氧化劑(PDTC)對(duì)大鼠局灶腦缺血/再灌注過程中星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)炎性介質(zhì)的影響

4、，并為抗氧化劑進(jìn)入臨床治療積累理論依據(jù)。 方法：雄性Wistar大鼠，通過改良線栓法制備大腦中動(dòng)脈局灶腦缺血2 h/再灌注模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)，假手術(shù)組(SC組)，單純?nèi)毖?再灌注組(I/R組)，缺血/再灌注+PDTC 50mg．kg<'-1>組(I/RP1)，缺血/再灌注+PDTC 100mg．kg<'-1>組(I/RP2)，生理鹽水組(NS組)。除正常對(duì)照組3只大鼠，其余各組根據(jù)再灌注時(shí)間的不同又分為2h、6h

5、、12h、24h、48h、72h共6個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只大鼠。 通過HE染色了解腦梗塞后腦組織的病理學(xué)變化。采用免疫組化法檢測(cè)GFAP、NF-κB p65、TNF-α、ICAM-1 的表達(dá)。原位雜交法檢測(cè)NF-κB p65 mRNA、TNF-αmRNA、ICAM-1 mRNA的表達(dá)。熒光免疫雙標(biāo)檢測(cè)NF-κB p65、TNF-α、ICAM-1在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)論： (1)Wistar大鼠局灶腦缺血/再灌

6、注后早期星形膠質(zhì)細(xì)胞即發(fā)生形態(tài)變化，在缺血區(qū)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量大量增加； (2)局灶腦缺血/再灌注早期，星形膠質(zhì)細(xì)胞最先表達(dá)NF-κB p65，其次TNF-α，最后ICAM-1，多分布在缺血灶周圍； (3)局灶腦缺血/再灌注后，星形膠質(zhì)細(xì)胞中NF-κB p65的活化誘導(dǎo)了TNF-α、ICAM-1的表達(dá)； (4)局灶腦缺血/再灌注后，星形膠質(zhì)細(xì)胞中ICAM-1的表達(dá)可能受TNF-α的調(diào)節(jié)； (5)局灶腦