縫隙連接通訊對腦缺血后星形膠質(zhì)細胞活化、增殖及分泌的影響.pdf

1、目的:探索縫隙連接蛋白在星形膠質(zhì)細胞的表達分布特點,并研究Cx43通道蛋白在氧糖剝奪損傷再灌注過程中的表達變化規(guī)律。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞,利用GFAP免疫熒光染色鑒定純度,并通過免疫熒光染色觀察Cx43縫隙連接蛋白在星形膠質(zhì)細胞中的表達規(guī)律。將純化后的星形膠質(zhì)細胞隨機分為正常(對照)組(培養(yǎng)基為含糖EBSS,置于37℃細胞培養(yǎng)箱)、OGD組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS,置于缺氧培養(yǎng)箱),氧糖剝奪實驗(OGD)1

2、h后,再灌注不同時間點(0h、3h、6h、12h、24h),應用免疫熒光染色和蛋白免疫印跡法檢測對照組和OGD組Cx43縫隙連接蛋白表達。
　　結果:依據(jù)文獻方法純化星形膠質(zhì)細胞,免疫熒光顯示Cx43通道蛋白呈點狀分布在GFAP陽性的膠質(zhì)細胞邊緣,且在兩個細胞間連接處表達較多。與正常組相比,OGD干預1h不會引起星形膠質(zhì)細胞活力的改變。Cx43縫隙連接總蛋白和Cx43縫隙連接磷酸化蛋白(P-Cx43)的表達在OGD干預后都有所增加

3、。
　　結論:Cx43在星形膠質(zhì)細胞胞膜上豐富表達。OGD誘導Cx43縫隙連接總蛋白和磷酸化蛋白(P-Cx43)的表達增加。
　　目的:研究氧糖剝奪再灌注后調(diào)控Cx43活性對星形膠質(zhì)細胞活化、增殖以及分泌功能的影響。
　　方法:將原代培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞,隨機分為正常(對照)組(培養(yǎng)基為含糖EBSS)、OGD組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS)、CBX組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS和廣譜縫隙連接通道阻滯劑CBX)和MFA組

4、(培養(yǎng)基為不含糖EBSS和相對特異性Cx43通道阻滯劑MFA),正常組置于37℃細胞培養(yǎng)箱,OGD組、CBX組合MFA組置于缺氧培養(yǎng)箱;應用LDH釋放試驗檢測藥物CBX和MFA的毒性作用;應用免疫熒光染色和蛋白免疫印跡法檢測Cx43通道抑制劑對OGD后再灌注星形膠質(zhì)細胞活化的影響;應用BrdU免疫熒光染色檢測Cx43通道抑制劑對OGD后再灌注星形膠質(zhì)細胞增殖的影響;及應用谷氨酸試劑盒檢測Cx43通道抑制劑對OGD后再灌注星形膠質(zhì)細胞分泌

5、功能的影響。
　　結果:與對照組相比,實驗所用濃度的縫隙連接通道阻滯劑CBX和MFA不會引起細胞凋亡和壞死;與正常培養(yǎng)條件下星形膠質(zhì)細胞相比,在單純OGD再灌注后,其GFAP免疫活性和表達量以及BrdU陽性細胞百分率升高,星形膠質(zhì)細胞胞體較正常組肥大,突起增多,而OGD后加入CBX和MFA后,其GFAP免疫活性和表達量以及BrdU陽性細胞百分率較OGD組下降明顯,星形膠質(zhì)細胞胞體體積和突起也較OGD組下降明顯,和正常組接近;OGD