亞低溫對腦缺氧缺血新生大鼠海馬星形膠質細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、[目的]亞低溫(mild hypothermia)是治療新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxicischemic brain damage，HIBD)的一種有效的方法，可通過降低腦細胞的能量代謝、減少細胞毒性產物的積聚、對抗細胞壞死等途徑發(fā)揮腦保護作用。星形膠質細胞(astrocyte，AST)是腦細胞的重要組成部分，在缺氧缺血(hypoxic-ischemia，HI)后的腦損傷與修復過程中扮演重要角色。既往研究重點多集中于亞低溫對神經元

2、的保護作用，對星形膠質細胞影響的研究極少，是否存在保護作用及其機制并不明了。本研究采用在體7日齡新生大鼠腦缺氧缺血模型及體外培養(yǎng)海馬星形膠質細胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型，觀察亞低溫對缺氧缺血性腦損傷后新生大鼠海馬星形膠質細胞增殖和凋亡的影響，探討亞低溫對未成熟腦缺氧缺血性損傷的保護機制。
　　[方法](一)在體實驗：首先制備大鼠腦缺氧缺血模型，7日齡大鼠左側頸總動脈結扎后置于含8

3、％氧氣的氮氧混合氣的37℃缺氧箱中缺氧2 h。對照組大鼠僅實施假手術，不進行缺氧缺血。術后動物隨機分為常溫處理組、亞低溫治療組、常溫對照組、亞低溫對照組；分別在HI后24 h、72 h和7天制備腦片，通過免疫組化計數膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)陽性細胞來評價星形膠質細胞增殖的變化；通過免疫組化雙標計數GFAP與caspase-3雙陽性細胞檢測星形膠質細胞的凋亡變化。(二)體

4、外實驗：培養(yǎng)1日齡大鼠海馬星形膠質細胞，采用氧糖剝奪(OGD)方法以模擬在體缺氧缺血損傷過程，采用CCK-8、Tunel及DAPI染色觀察亞低溫處理后星形膠質細胞增殖和凋亡變化。
　　[結果]大鼠海馬區(qū)域GFAP染色結果顯示，HI后72 h和7天亞低溫治療組GFAP陽性細胞低于常溫組，同一時間點兩組比較具有統計學意義(P<0.05)；HI后72 h常溫處理組海馬部位84.5％GFAP陽性細胞發(fā)生Caspase-3共表達，而亞低溫治