亞低溫對腦缺氧缺血新生大鼠海馬星形膠質(zhì)細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、[目的]亞低溫(mild hypothermia)是治療新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxicischemic brain damage，HIBD)的一種有效的方法，可通過降低腦細胞的能量代謝、減少細胞毒性產(chǎn)物的積聚、對抗細胞壞死等途徑發(fā)揮腦保護作用。星形膠質(zhì)細胞(astrocyte，AST)是腦細胞的重要組成部分，在缺氧缺血(hypoxic-ischemia，HI)后的腦損傷與修復過程中扮演重要角色。既往研究重點多集中于亞低溫對神經(jīng)元

2、的保護作用，對星形膠質(zhì)細胞影響的研究極少，是否存在保護作用及其機制并不明了。本研究采用在體7日齡新生大鼠腦缺氧缺血模型及體外培養(yǎng)海馬星形膠質(zhì)細胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型，觀察亞低溫對缺氧缺血性腦損傷后新生大鼠海馬星形膠質(zhì)細胞增殖和凋亡的影響，探討亞低溫對未成熟腦缺氧缺血性損傷的保護機制。
　　[方法](一)在體實驗：首先制備大鼠腦缺氧缺血模型，7日齡大鼠左側(cè)頸總動脈結(jié)扎后置于含8

3、％氧氣的氮氧混合氣的37℃缺氧箱中缺氧2 h。對照組大鼠僅實施假手術(shù)，不進行缺氧缺血。術(shù)后動物隨機分為常溫處理組、亞低溫治療組、常溫對照組、亞低溫對照組；分別在HI后24 h、72 h和7天制備腦片，通過免疫組化計數(shù)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)陽性細胞來評價星形膠質(zhì)細胞增殖的變化；通過免疫組化雙標計數(shù)GFAP與caspase-3雙陽性細胞檢測星形膠質(zhì)細胞的凋亡變化。(二)體

4、外實驗：培養(yǎng)1日齡大鼠海馬星形膠質(zhì)細胞，采用氧糖剝奪(OGD)方法以模擬在體缺氧缺血損傷過程，采用CCK-8、Tunel及DAPI染色觀察亞低溫處理后星形膠質(zhì)細胞增殖和凋亡變化。
　　[結(jié)果]大鼠海馬區(qū)域GFAP染色結(jié)果顯示，HI后72 h和7天亞低溫治療組GFAP陽性細胞低于常溫組，同一時間點兩組比較具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HI后72 h常溫處理組海馬部位84.5％GFAP陽性細胞發(fā)生Caspase-3共表達，而亞低溫治