亞低溫對星形膠質(zhì)細胞缺氧-復(fù)氧后AQP4、AQP5表達的影響.pdf

1、[目的]：觀察缺氧／復(fù)氧條件下星形膠質(zhì)細胞AQP4、AQP5的表達變化以及亞低溫對其表達變化的影響，探討腦缺血再灌注腦水腫與AQP4、AQP5的關(guān)系以及亞低溫對腦缺血再灌注損傷的保護機制。 [方法]：利用新生24小時內(nèi)的SD大鼠，取皮層新鮮腦組織，經(jīng)機械分離和化學(xué)消化，制作細胞懸液，調(diào)整細胞密度為5×10<'5>／cm<'2>，接種到含胎牛血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置培養(yǎng)箱中進行原代培養(yǎng)，利用倒置顯微鏡觀察細胞生長及分化的形態(tài)學(xué)變化

2、。培養(yǎng)8-9天后傳代，當(dāng)傳至第3代，細胞生長穩(wěn)定，自然純化后，神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glia fibrillary acid protein，GFAP)免疫細胞化學(xué)染色鑒定星形膠質(zhì)細胞，95％以上為陽性細胞，符合實驗要求。將星形膠質(zhì)細胞分為正常對照組(C)、常溫缺氧／復(fù)氧組(H／R)、亞低溫干預(yù)缺氧／復(fù)氧組(M+H／R)。用三氣培養(yǎng)箱分別調(diào)節(jié)溫度37℃及32℃，以95％N<，2>和5％CO<,2>造成細胞缺氧，用臺盼藍染色法測定37℃及

3、32℃時，缺氧／復(fù)氧不同時間點AC的存活率，作為細胞受損指標，用倒置相差顯微鏡對細胞進行形態(tài)學(xué)觀察，應(yīng)用細胞免疫化學(xué)技術(shù)檢驗缺氧／復(fù)氧各個時間點AQP4、AQP5的表達變化及亞低溫的干預(yù)效果。 [結(jié)果]： 1．體外培養(yǎng)的AC傳3代后，細胞胞體較大而扁，形狀不規(guī)則，細胞突起較多較長，呈放射狀。GFAP免疫細胞化學(xué)染色鑒定星形膠質(zhì)細胞胞漿呈棕黃色。 2．37℃缺氧8小時后，細胞的形態(tài)、存活力變化不明顯，部分細胞邊緣皺

4、縮。隨著復(fù)氧時間的延長，細胞變化逐漸明顯，細胞損傷表現(xiàn)明顯加強，表現(xiàn)為細胞腫脹、變圓、輪廓不清，突起增粗縮短，細胞間連接斷裂，逐漸出現(xiàn)細胞死亡、崩解、胞體漂浮。細胞存活力下降，呈明顯的時效關(guān)系。32℃干預(yù)時大部分細胞輪廓較清晰，胞周光暈明顯，突起存在，僅有少數(shù)細胞出現(xiàn)分離現(xiàn)象。細胞存活力較缺氧／復(fù)氧組增加。 3．細胞免疫化學(xué)的半定量方法觀察AQP4、AQP5的表達發(fā)現(xiàn)：37℃正常氧供時AQP4、AQP5位于細胞膜上的表達無明顯變

5、化；37℃缺氧8小時，AQP4陽性表達細胞數(shù)減少，AQP5陽性表達細胞數(shù)也減少。而復(fù)氧后AQP4、AQP5陽性表達細胞數(shù)升高并隨時間延長呈增高趨勢。與對照組相比差異有顯著性(p<0.01，p<0.05)。 4．32℃干預(yù)缺氧／復(fù)氧時AQP4、AQP5陽性表達細胞數(shù)在各個時間點均較37℃缺氧／復(fù)氧組減少(p<0.01，p<0.05)。 [結(jié)論]： 1．星形膠質(zhì)細胞對缺氧的耐受能力較強，復(fù)氧后細胞損害隨著時間延長明顯