腹瀉大鼠結(jié)腸AQP4表達的研究.pdf

1、目的：旨在通過檢測腹瀉后不同時間點大鼠升結(jié)腸和降結(jié)腸粘膜水通道蛋白4(AQP4)表達情況，探討AQP4在結(jié)腸水轉(zhuǎn)運的中的意義，為正確認識腸道水代謝紊亂相關(guān)性疾病提供新的思路。 方法：取正常健康雄性SD大鼠32只(體重約180-200g)，隨機分為4組，每組8只，一組為對照組，用0.9％Nacl 10g/kg灌胃，其余三組通過用20％的甘露醇10g/kg灌胃構(gòu)建大鼠腹瀉模型，按照腹瀉時間的長短分為腹瀉后3、9和15小時三個實驗組。

2、通過計算腹瀉指數(shù)評價模型成功與否，模型成功后實驗組分別于腹瀉后3、9和15小時用3.6％水合氯醛腹腔麻醉(8ml/kg)后開腹，取升結(jié)腸起始段、降結(jié)腸末段各兩小塊組織，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫組化分別對各組別大鼠升、降結(jié)腸粘膜細胞AQP4 mRNA和AQP4蛋白表達進行定量分析，并對AQP4蛋白表達進行定位分析。 結(jié)果： 1.試驗組大鼠在灌胃后2小時左右均出現(xiàn)腹瀉，對照組經(jīng)觀察24小時未見腹瀉，說明單

3、次灌胃刺激并不能引起大鼠腹瀉，而甘露醇灌胃可以成功構(gòu)建腹瀉模型；通過計算腹瀉指數(shù)發(fā)現(xiàn)腹瀉組與對照組的腹瀉指數(shù)有差異，腹瀉組內(nèi)亦有差異，在腹瀉后9小時腹瀉指數(shù)最高，腹瀉最嚴重，而在腹瀉開始后3小時及處于恢復(fù)期的腹瀉后15小時時腹瀉指數(shù)相對較低。 2.對照組和腹瀉組(3、9和15h組)大鼠升、降結(jié)腸均有AQP4 mRNA和蛋白表達，且升結(jié)腸表達量(升結(jié)腸AQP4 mRNA分別為：1.643±0.105，1.121±0.019，0.4

4、55±0.017，1.284±0.046；升結(jié)腸蛋白表達分別為：14.4±1.9，9.3±1.0，3.8±0.6，10.2±1.0)明顯高于降結(jié)腸(降結(jié)腸AQP4 mRNA分別為：1.264±0.066，0.975±0.028，0.319±0.012，1.023±0.011；降結(jié)腸蛋白表達分別為：9.3±0.8，7.8±0.9，2.3±0.4，8.5±1.3)。 3.腹瀉各組升、降結(jié)腸AQP4 mRNA和蛋白表達量均較對照組減少