阻斷AT1受體后自發(fā)性高血壓大鼠腎臟AQP3和AQP4表達(dá)的變化.pdf

1、目的：觀察12周齡自發(fā)性高血壓大鼠用纈沙坦灌胃后血壓的變化及腎臟中水通道蛋白3、4表達(dá)的變化，探討纈沙坦阻斷AT1受體后對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠鼠腎臟水通道蛋白3、4表達(dá)的影響。為新型抗高血壓藥的研發(fā)提供可能的作用靶點(diǎn)。
　　方法：將11周齡自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）和Wistar Kyoto（WKY）大鼠各12只，隨機(jī)分為4組，分別為：SHR纈沙坦灌胃組（SHR-V）、S

2、HR生理鹽水灌胃組（SHR-N）、WKY大鼠纈沙坦灌胃組（WKY-V）、WKY大鼠生理鹽水灌胃組（WKY-N），每組各6只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，固定時(shí)間段采用鼠尾動(dòng)脈無創(chuàng)測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量血壓，每只大鼠測(cè)量三次，取平均值。對(duì)SHR-V組和WKY-V組大鼠分別進(jìn)行纈沙坦10mg(kg/day)灌胃，同等體積的生理鹽水對(duì) SHR-N組和WKY-N組大鼠進(jìn)行灌胃，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間增至28周，期間根據(jù)每周大鼠體重變化情況調(diào)整灌胃藥物劑量。灌胃28周后，分別

3、取大鼠腹主動(dòng)脈血測(cè)醛固酮值；取腎組織，實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain，RT-PCR)方法測(cè)定其 AQP3 mRNA、AQP4 mRNA的表達(dá)；用免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）法檢測(cè) AQP3、AQP4蛋白定位表達(dá)；免疫印跡法（Western blotting，WB）檢測(cè)AQP3、AQP4蛋白定量表達(dá)，對(duì)上述指標(biāo)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析

4、。
　　結(jié)果：⑴WKY-N組和WKY-V組大鼠血壓值無明顯差異（P>0.05）；與SHR-N組相比，SHR-V組血壓控制較好，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長未見血壓升高，兩組血壓值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；SHR-N組的血壓值隨實(shí)驗(yàn)周數(shù)的增加呈明顯升高趨勢(shì)，灌胃28周時(shí)均高于其它對(duì)照組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。⑵血漿醛固酮值結(jié)果：SHR-V組醛固酮水平與WKY-N組、WKY-V組比較，醛固酮水平顯著性增高（P<0.05）；

5、SHR-N組醛固酮水平高于WKY-N組、WKY-V組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SHR-V組醛固酮水平與SHR-N組比較，醛固酮升高水平增高（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑶免疫組織化學(xué)結(jié)果：與 WKY-N組、WKY-V組、SHR-V組比較，AQP3在SHR-N組中表達(dá)量最少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；AQP3在SHR-V組表達(dá)高于SHR-N組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。WKY-N和WKY-V組大鼠腎臟A

6、QP4蛋白表達(dá)量較SHR-N組、SHR-V組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；AQP4在SHR-V組表達(dá)高于SHR-N組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。⑷RT-PCR方法測(cè)定結(jié)果：SHR-V組大鼠腎臟中的AQP3 mRNA、AQP4 mRNA含量表達(dá)水平顯著高于其他三組表達(dá)（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SHR-N組大鼠AQP3 mRNA、AQP4 mRNA含量表達(dá)水平明顯高于WKY-N組、WKY-V組（P<0.05

7、），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸免疫印跡法結(jié)果：AQP3、AQP4蛋白在SHR-V組大鼠腎臟中的表達(dá)水平明顯高于SHR-N組大鼠腎臟中AQP3蛋白表達(dá)（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AQP3、AQP4蛋白在WKY-N組大鼠腎臟中的表達(dá)與WKY-V組大鼠腎臟中的AQP3蛋白表達(dá)無明顯差異（P>0.05），差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SHR-N組大鼠腎臟中AQP3、AQP4的蛋白表達(dá)低于WKY-N組、WKY-V組大鼠腎臟蛋白（P<0.05），差異