鹽酸戊乙奎醚對(duì)LPS致大鼠急性肺損傷后AQP1、AQP5表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)測(cè)定肺組織濕干重比值（wet/dry，W/D）、肺通透性（pulmonary permeability index，PPI）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量和水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）表達(dá)的變化，以及肺組織病理改變程度，研究不同劑量鹽酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochlor

2、ide，PHCD）對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致大鼠急性肺損傷（acute lung injury，ALI）的治療效果及可能的治療機(jī)制。 方法:75只健康雄性S-D大鼠，180～200g，自由攝水一周后隨機(jī)分為5組（n=15）：正常對(duì)照組（C組）、ALI組、鹽酸戊乙奎醚治療組（P組：低劑量PL組、中劑量PM組、高劑量PH組）。采用尾靜脈注射LPS（5mg/kg）建立ALI大鼠模型，低、中、高劑量治療

3、組于10分鐘后分別從腹腔注入鹽酸戊乙奎醚0.05mg/kg、0.15mg/kg、0.45mg/kg；C組尾靜脈注射等量生理鹽水后，10分鐘后腹腔注入生理鹽水1ml。根據(jù)不同的處死時(shí)間（2h、6h、12h）再分為3個(gè)亞組（n=5）。大鼠麻醉后主動(dòng)脈取血檢測(cè)血漿蛋白含量，收集左肺灌洗液測(cè)定其蛋白含量，計(jì)算肺通透指數(shù)；右肺上葉行電鏡觀測(cè)；右肺中葉行光鏡、免疫組化AQP1、AQP5檢測(cè)；右肺下葉測(cè)定SOD活性、MDA含量；右肺副葉計(jì)算肺濕干重比

4、值。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，組間比較采用析因分析的方差分析。 結(jié)果: （1）肺組織W/D、PPI值及SOD活性、MDA含量：正常對(duì)照組（C組）以上觀測(cè)值在2h、6h、12h時(shí)無(wú)明顯變化（P>0.05）；與C組相比，ALI組、各劑量治療組（P組）2h時(shí)W/D、PPI值及MDA含量均升高，SOD活性均降低，12h時(shí)變化更加明顯（P<0.05）；與ALI組相比，P組各時(shí)間點(diǎn)W/D、PPI值及MDA

5、含量均降低，SOD活性均升高（P<0.05）；高（PH組）、中劑量治療組（PM組）對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)與低劑量治療組（PL組）相比有明顯差異（P<0.05），但高、中劑量組間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 （2）肺組織AQP1、AQP5表達(dá)：各組肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞上可見(jiàn)棕黃色陽(yáng)性AQP1顆粒，肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞上見(jiàn)棕黃色陽(yáng)性為AQP5表達(dá)。C組AQP1、AQP5在2h、6h、12h時(shí)表達(dá)均無(wú)明顯差異（P>0.05）；

6、ALI組以上時(shí)間點(diǎn)AQP1、AQP5表達(dá)低于P組，表達(dá)強(qiáng)度隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降；P組各時(shí)間點(diǎn)AQP1、AQP5表達(dá)高于ALI組，但低于C組，表達(dá)強(qiáng)度隨時(shí)間延長(zhǎng)而上升（P<0.05）；ALI組AQP1于6h時(shí)下降出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)差異，AQP5于12h時(shí)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)差異（P<0.05）；P組AQP1于6h時(shí)上升有統(tǒng)計(jì)差異，AQP5于12h時(shí)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)差異（P<0.05）；各時(shí)間點(diǎn)高劑量治療組AQP1表達(dá)高于中、低劑量治療組（P<0.05），中、低劑量組間無(wú)統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；各時(shí)間點(diǎn)高、中劑量組AQP5表達(dá)高于低劑量組（P<0.05），高、中劑量組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。 （3）肺組織病理觀察： 大體觀察：C組外觀正常，肺臟顏色粉紅；ALI組肺部均有不同程度的腫脹，表面可見(jiàn)暗紅色點(diǎn)狀或塊狀病灶，切面有淡紅色或白色泡沫樣液體溢出；治療組肺腫脹程度減輕，表面及切面病變部位減少，肺損傷減輕。 光鏡觀察：C組結(jié)構(gòu)正常；ALI組肺泡壁破壞嚴(yán)重，肺間質(zhì)、肺泡水腫

8、，肺泡間隔增寬，肺內(nèi)大量多形核白細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞和炎性細(xì)胞；PH組肺泡結(jié)構(gòu)尚可，肺間質(zhì)水腫增寬及多形核白細(xì)胞浸潤(rùn)較ALI組明顯減輕。 電鏡觀察：ALI組電鏡下見(jiàn)肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞膜連續(xù)性中斷，邊界不清，胞漿空化，核腫脹、溶解甚至消失。Ⅱ型上皮細(xì)胞板層小體尚存，但胞漿空化、溶解，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿明顯腫脹；治療組肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞腫脹明顯，細(xì)胞輪廓尚較明顯，基本結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯破壞，Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)板層體比模型組稍增多，偶見(jiàn)板

9、層體排空現(xiàn)象，細(xì)胞輕度腫脹，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可見(jiàn)腫脹。 結(jié)論: （1）注射LPS后ALI組隨時(shí)間延長(zhǎng)肺通透性、含水量增高，肺組織SOD活性下降，MDA含量升高，AQP1、AQP5表達(dá)降低，肺組織病理改變逐漸加重，12h未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。 （2）不同劑量鹽酸戊乙奎醚治療后，血管內(nèi)皮與肺泡上皮的損傷減輕，肺組織肺通透性、含水量降低，肺組織MDA含量降低、SOD活性增強(qiáng)，AQP1、AQP5表達(dá)上調(diào)，肺組織病理改變明顯減輕，12