布美他尼影響缺氧-復(fù)氧損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞的活性及其AQP4mRNA的表達(dá).pdf

1、目的：研究布美他尼對缺氧/復(fù)氧損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及其AQP4mRNA表達(dá)的影響。
　　方法：使用新生48小時內(nèi)的SD大鼠，提取腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，并傳代。星形膠質(zhì)細(xì)胞傳至第4代后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。使用5％CO2+95%N2制造缺氧環(huán)境。檢測各組星形膠質(zhì)細(xì)胞活性和AQP4表達(dá)，星形膠質(zhì)細(xì)胞活性檢測：分為正常對照組、缺氧/復(fù)氧組（H/R組）、布美他尼干預(yù)組（50umol/L）、布美他尼干預(yù)組（100umol/L），采用噻唑

2、藍(lán)（thiazoyl blue tetrazolium bromide，MTT）染色法以及檢測乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）的釋放量，判定星形膠質(zhì)細(xì)胞的受損害程度，比較各組星形膠質(zhì)細(xì)胞活力；AQP4mRNA表達(dá)的檢測：分為正常對照組、缺氧/復(fù)氧組（H/R組）、布美他尼干預(yù)組（100umol/L），采用Q-PCR技術(shù)分別檢測各組AQP4mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，比較各組間及各組內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4mRNA表達(dá)

3、變化。
　　結(jié)果：1.星形膠質(zhì)細(xì)胞活性檢測：MTT降解率：與正常對照組相比，H/R組星形膠質(zhì)細(xì)胞MTT降解率顯著降低（p<0.05）；與H/R組相比，布美他尼干預(yù)組（50umol/L）星形膠質(zhì)細(xì)胞MTT降解率顯著增高（p<0.05）；與H/R相比，布美他尼干預(yù)組（100umol/L）星形膠質(zhì)細(xì)胞 MTT降解率顯著增高（p<0.05）。布美他尼干預(yù)組（50umol/L）和布美他尼干預(yù)組（100umol/L）之間MTT降解率無顯著差異

4、（p>0.05）。LDH釋放量：與正常對照組相比，H/R組星形膠質(zhì)細(xì)胞LDH釋放量顯著增高（p<0.05）；與H/R組相比，布美他尼干預(yù)組（50umol/L）星形膠質(zhì)細(xì)胞LDH釋放量顯著降低（p<0.05）；與H/R組相比，布美他尼干預(yù)組（100umol/L）星形膠質(zhì)細(xì)胞 LDH釋放量顯著降低（p<0.05）。布美他尼干預(yù)組（50umol/L）和布美他尼干預(yù)組（100umol/L）之間LDH釋放量無顯著差異（p>0.05）。2.AQP4

5、的表達(dá)：缺氧/復(fù)氧損傷后，星形膠質(zhì)細(xì)胞的AQP4mRNA轉(zhuǎn)錄水平在72小時內(nèi)（0h、3h、24h、72h）逐步升高（P<0.01），與正常對照組比較，H/R組在復(fù)氧后各點(diǎn)星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4mRNA的表達(dá)增加（P<0.01）；使用布美他尼預(yù)（100umol/L）處理，缺氧/復(fù)氧損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4mRNA轉(zhuǎn)錄水平在72小時內(nèi)（0h、3h、24h、72h）逐步升高（P<0.01），與 H/R組比較，各對應(yīng)時間點(diǎn)布美他尼干預(yù)組星形膠質(zhì)