aFGF對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:通過建立海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)的體外培養(yǎng)模型，從細(xì)胞凋亡的模塊探討酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF)對(duì)慶大霉素(GM)誘導(dǎo)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　方法:SD乳鼠的海馬組織經(jīng)體外分離和純化培養(yǎng)，取傳至第三代的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光法進(jìn)行細(xì)胞鑒定，獲得純度大于95％的星形膠質(zhì)細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞接種于24孔板內(nèi):實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為3組:①對(duì)照組:正常培養(yǎng);②GM組:2 g/L GM作

2、用細(xì)胞24h;③aFGF+GM組:加入4.25μg/L aFGF作用細(xì)胞24h后再加2g/L GM培養(yǎng)24h。各組分別設(shè)6個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。24h后通過應(yīng)用TUNEL結(jié)合DAPI核染色法和AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法反映細(xì)胞凋亡的表達(dá)狀況。
　　結(jié)果:(1)形態(tài)學(xué)觀察:對(duì)照組在光鏡下可見細(xì)胞輪廓清晰，折光性強(qiáng)，細(xì)胞胞體發(fā)出較多長而分支的突起，呈現(xiàn)出形態(tài)多樣的梭形、多邊形交織排列的成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);GM組在光鏡下可見星形膠質(zhì)

3、細(xì)胞的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，部分細(xì)胞出現(xiàn)皺縮成團(tuán)，胞體分支的突起連接中斷甚至出現(xiàn)細(xì)胞脫落的現(xiàn)象，喪失了細(xì)胞的完整性結(jié)構(gòu)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有較多的顆粒和空泡存在;aFGF+GM組在光鏡下可見細(xì)胞突起回縮減弱，皺縮程度減輕，胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)也見不同程度的緩解，細(xì)胞聚集成團(tuán)和細(xì)胞脫落現(xiàn)象減少，細(xì)胞輪廓較清晰，突起連接中斷少見且細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒和空泡減少。(2)2g/L GM作用細(xì)胞24h能抑制細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)給予4.25μg/L aFGF處理，星形

4、膠質(zhì)細(xì)胞凋亡率下降，其中損傷組采用TUNEL染色陽性的細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.01);保護(hù)組用TUNEL染色陽性的細(xì)胞數(shù)較損傷組顯著降低(P＜0.01);但是，保護(hù)組與正常組之間不具差異性(P＞0.05);而通過AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法可見:正常對(duì)照組細(xì)胞的總凋亡率為8.37％，損傷組細(xì)胞的總凋亡率28.66％，保護(hù)組細(xì)胞的總凋亡率為25.55％。其中，保護(hù)組細(xì)胞的早期凋亡率與損傷組細(xì)胞的早期凋亡率相比未見區(qū)別