磁刺激誘導下HMGB1對大鼠星形膠質(zhì)細胞遷移影響的體外研究.pdf

1、目的:
　　高遷移率族蛋白B1（High-mobility group box1，HMGB1）是廣泛表達于真核細胞內(nèi)高度保守的一種非組氨酸核蛋白，參與基因的表達和核小體的定位。HMGB1參與了CNS疾病的發(fā)生發(fā)展，在腦卒中和脊髓損傷早期可作為炎癥因子加重神經(jīng)炎癥反應，后期則可促進神經(jīng)血管的再生有利于神經(jīng)功能的恢復。在胚胎發(fā)育時期，HMGB1參與神經(jīng)元突觸的生長及細胞的遷移。CNS損傷后，激活的星形膠質(zhì)細胞也可分泌HMGB1，但其對

2、星形膠質(zhì)細胞遷移能力的影響還不清楚。前期的研究表明磁刺激能激活并調(diào)控星形膠質(zhì)細胞的遷移能力。本實驗將進一步研究MS誘導下HMGB1對星形膠質(zhì)細胞遷移的影響，并探討其作用機制。
　　方法:
　　1.星形膠質(zhì)細胞的提取、培養(yǎng)及鑒定:提取出生后為2-3天SD(Sprague-Dawley)大鼠大腦皮質(zhì)組織，分離培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞，并觀察其生長及形態(tài)，并用細胞免疫熒光技術觀察GFAP蛋白的表達，鑒定星形膠質(zhì)細胞的純度。
　　2.

3、實驗分組:根據(jù)不同頻率的磁刺激將實驗分為3組:①對照組;②低頻磁刺激組(1HZ);③高頻磁刺激組(10HZ)。觀察細胞遷移能力，并運用Western Blot觀察ERK1/2磷酸化及HMGB1表達情況。
　　3.干擾HMGB1表達后細胞遷移實驗分組:①控制組（磁刺激）;②Si-RNA組（磁刺激+HMGB1 Si-RNA）。觀察細胞遷移能力，并運用Western Blot檢測干擾效果。
　　4.U0126阻滯后細胞遷移實驗分組

4、:①控制組（磁刺激）;②實驗組（磁刺激+U0126）。觀察細胞遷移能力，并運用Western Blot觀察ERK1/2磷酸化及HMGB1表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.取培養(yǎng)的第3代大鼠星形膠質(zhì)細胞，用GFAP熒光染色鑒定，星形膠質(zhì)細胞純度＞95％。
　　2.高頻磁刺激促進星形膠質(zhì)細胞的遷移能力，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。且ERK1/2磷酸化及HMGB1的表達水平明顯高于對照組和低頻磁刺激組，差異具有統(tǒng)計學意

5、義（P＜0.01）。
　　3.HMGB1 Si-RNA干擾后，HMGB1表達水平顯著下降，且星形膠質(zhì)細胞的遷移能力相應明顯下降，與控制組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.U0126阻滯后，HMGB1表達水平顯著降低，且星形膠質(zhì)細胞的遷移能力相應明顯下降，與控制組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.高頻磁(10HZ)刺激促進星形膠質(zhì)細胞的遷移，并可促進ERK1/2的磷酸化。