磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分不同強(qiáng)度磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制研究
　　 實(shí)驗(yàn)一：不同強(qiáng)度磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響
　　 目的:研究不同強(qiáng)度磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的量效關(guān)系。方法:24只Sprague-Dawley大鼠按刺激強(qiáng)度被隨機(jī)分為對(duì)照組（刺激強(qiáng)度:0Tesla）、0.76T組（刺激強(qiáng)度:0.76Tesla）、1.52T組（刺激強(qiáng)度:1.52Tesla）、1.9T組（刺激強(qiáng)度:1.9Tesla），4組的刺激頻率為

2、1Hz，刺激量為30脈沖，均采用溴乙錠（EB）注射入脊髓左側(cè)背索復(fù)制局灶性的脊髓損傷模型。刺激14天后，處死大鼠，Western-Blot檢測(cè)GFAP、MAP-2，采用圖像分析系統(tǒng)觀察GFAP、Brdu和MAP-2的免疫組化表達(dá)及脊髓損傷空洞體積的變化。結(jié)果:隨著磁刺激強(qiáng)度的增加，在14天時(shí)空洞的體積逐漸縮小，組間差異具有顯著性差異（P＜0. 05)。在空洞縮小的區(qū)域中，可以觀察到GFAP的陽(yáng)性表達(dá)，而無(wú)Brdu、MAP-2的陽(yáng)性表達(dá)。

3、隨著磁刺激強(qiáng)度的增加，GFAP的陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)（P＜0. 05)。Western-Blot顯示：隨著磁刺激強(qiáng)度的增加，GFAP的光密度值相應(yīng)增加，而MAP-2的光密度值沒(méi)有明顯變化，與組化的變化趨勢(shì)一致。結(jié)論:刺激頻率為1Hz,刺激強(qiáng)度不大于1.9 Tesla的條件下，磁刺激可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，隨著刺激強(qiáng)度的增強(qiáng)，星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的能力亦增強(qiáng)。
　　 實(shí)驗(yàn)二：不同強(qiáng)度磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的機(jī)制研究
　　

4、目的:研究不同劑量ERK抑制劑U0126對(duì)1Hz磁刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的影響，以探討不同強(qiáng)度磁刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用和ERK信號(hào)通路的關(guān)系，并選擇U0126合適的阻滯劑量。方法:24只Sprague-Dawley大鼠按U0126劑量被隨機(jī)分為對(duì)照組（0mg/kg U0126，n=6）、低劑量組（0.1mg/kg U0126，n=6）、中劑量組（0.2mg/kg U0126，n=6）、高劑量組（0.4mg/kg U0126，

5、n=6），4組的刺激參數(shù)都為頻率1Hz，強(qiáng)度1.52Tesla，刺激量為30脈沖；均采用溴乙錠（EB）注射入脊髓左側(cè)背索復(fù)制局灶性的脊髓損傷模型。刺激14天后，處死大鼠，Western-Blot檢測(cè)GFAP、ERK1/2和MAP-2，采用圖像分析系統(tǒng)觀察GFAP、ERK1/2和MAP-2的免疫組化表達(dá)及脊髓損傷空洞體積的變化。結(jié)果:隨著U0126劑量的增加，在14天時(shí)空洞的體積逐漸增大，GFAP和ERK1/2的陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱，與對(duì)照組

6、相比具有顯著性差異（P﹤0. 05)；并且，GFAP和ERK1/2的陽(yáng)性表達(dá)呈相同的趨勢(shì)；U0126中劑量組和高劑量組作用則無(wú)明顯差異（P﹥0. 05）；而病灶區(qū)域MAP-2呈陰性表達(dá)。Western-Blot顯示：隨著U0126劑量的增加，ERK1/2逐漸被抑制，0.2mg/kg和0.4mg/kg U0126都可完全抑制ERK1/2的表達(dá)，隨著ERK逐漸被抑制，GFAP的表達(dá)亦逐漸減弱。結(jié)論:不同劑量的U0126可抑制1Hz磁刺激引起

7、的星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，0.2mg/kg是較合適的劑量；1.52Tesla，1Hz磁刺激引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移與ERK信號(hào)通路有關(guān)。
　　 第二部分不同頻率磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制研究
　　 實(shí)驗(yàn)一：不同頻率磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響
　　 目的:研究不同頻率磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的量效關(guān)系。方法:30只Sprague-Dawley大鼠按刺激頻率被隨機(jī)分為對(duì)照組（刺激頻率:0Hz，強(qiáng)度:1.5

8、2Tesla）、1Hz組（刺激頻率:1Hz，強(qiáng)度:1.52Tesla）、5Hz組（刺激頻率：5Hz，強(qiáng)度:1.52Tesla）、10Hz組（刺激頻率:10Hz，強(qiáng)度:1.52Tesla）和20Hz組（刺激頻率:20Hz，強(qiáng)度:1.52Tesla），5組的刺激量均為30個(gè)脈沖，采用溴乙錠（EB）注射入脊髓左側(cè)背索復(fù)制局灶性的脊髓損傷模型。刺激14天后，處死大鼠，Western-Blot檢測(cè)GFAP、MAP-2,采用圖像分析系統(tǒng)觀察GFAP

9、、Brdu和MAP-2的表達(dá)及脊髓損傷區(qū)空洞體積的變化。結(jié)果:隨著磁刺激頻率的增加，在第14天時(shí)空洞的體積逐漸縮小，組間差異具有顯著性差異（P＜0. 05)。在空洞縮小的區(qū)域中，可以觀察到GFAP的陽(yáng)性表達(dá)，而無(wú)Brdu和MAP-2的陽(yáng)性表達(dá)。隨著磁刺激頻率的增加，GFAP的陽(yáng)性表達(dá)亦顯著增強(qiáng)（P＜0. 05)。Western-Blot顯示：隨著磁刺激頻率的增加，GFAP的光密度值相應(yīng)增加，而MAP-2的光密度值沒(méi)有明顯變化，與組化變化

10、趨勢(shì)一致。結(jié)論:刺激強(qiáng)度為1.52 Tesla,刺激頻率不大于20Hz的條件下，磁刺激可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，并隨著刺激頻率的提高，星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的能力亦增強(qiáng)。
　　 實(shí)驗(yàn)二：不同頻率磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的機(jī)制研究
　　 目的:研究不同頻率磁刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移過(guò)程中ERK1/2所起的作用，以探討不同頻率磁刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移作用的機(jī)制，并選擇U0126合適的阻滯劑量。方法:24只Sprague-Da

11、wley大鼠按U0126劑量被隨機(jī)分為對(duì)照組（0mg/kg U0126，n=6）、低劑量組（0.1mg/kg U0126，n=6）、中劑量組（0.2mg/kg U0126，n=6）、高劑量組（0.4mg/kg U0126，n=6），4組的磁刺激參數(shù)均為頻率10Hz、強(qiáng)度1.52 Tesla，刺激量30脈沖，均采用溴乙錠（EB）注射入脊髓左側(cè)背索復(fù)制局灶性的脊髓損傷模型。刺激14天后，處死大鼠，Western-Blot檢測(cè)GFAP、ERK

12、1/2和MAP-2，采用圖像分析系統(tǒng)觀察GFAP、ERK1/2和MAP-2的表達(dá)及脊髓損傷空洞體積的變化。結(jié)果:隨著U0126劑量的增加，在第14天時(shí)空洞的體積逐漸增大，GFAP和ERK1/2的陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱，與對(duì)照組相比具有顯著性差異（P﹤0. 05)，U0126中劑量組和高劑量組的作用相似無(wú)明顯差異（P﹥0. 05）。而病灶區(qū)域MAP-2呈陰性表達(dá)。Western-Blot顯示：隨著U0126劑量的增加，ERK1/2逐漸被抑制，0