VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞定向遷移及增值的實驗研究.pdf

1、目的：建立人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞分離、培養(yǎng)并鑒定的方法;觀察血管內(nèi)皮生長因子VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞的定向遷移及增值的影響。
　　方法：采用CD133標記的磁珠分選法從人腦星形膠質(zhì)瘤組織中分離出腦星形膠質(zhì)瘤CD133+細胞,神經(jīng)干細胞球無血清培養(yǎng)法進行分選后細胞培養(yǎng),應用細胞免疫熒光染色對腫瘤球細胞及其分化細胞進行鑒定,并進行裸鼠體內(nèi)荷瘤實驗。免疫熒光染色檢測血管內(nèi)皮生長因子受體VEGFR在人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞中的

2、表達。免疫印跡法檢測VEGF在人腦惡性星形膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的蛋白表達。Transwell轉(zhuǎn)移模型評價VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞的遷移影響。CCK8法檢測VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞增殖的影響。
　　結(jié)果：成功培養(yǎng)出人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤細胞球,具有較強的單細胞克隆增殖能力,檢測干細胞標記物CD133,Nestin陽性,分化后細胞表達神經(jīng)元β-tubulinⅢ和星形膠質(zhì)細胞GFAP特異性抗原,裸鼠體內(nèi)荷瘤實驗成功種植出

3、腫瘤;免疫熒光組織化學法檢測到人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞VEGFR分選后表達明顯多于分選前表達。免疫印跡法檢測人腦惡性星形膠質(zhì)瘤VEGF表達明顯高于正常腦組織。Transwell體外細胞遷移實驗發(fā)現(xiàn),人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞能順VEGF濃度差定向遷移,且這一作用可被VEGF受體抑制劑所拮抗。VEGF能促進人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細胞在無血清環(huán)境中的增殖。
　　結(jié)論：VEGFR在CD133陽性腫瘤細胞中高表達,VEGF在人腦惡性星形膠質(zhì)瘤