免疫磁珠法分離、培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞.pdf

1、目的：建立免疫磁珠法分離并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法。 方法：將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本，在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下，去除血管及壞死的腫瘤組織，通過(guò)反復(fù)剪切、消化和吹打成單細(xì)胞懸液，200 目篩網(wǎng)過(guò)濾，免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細(xì)胞，用神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球，取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化，分化前、后分別用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定腫瘤干細(xì)胞及分化后細(xì)胞。 結(jié)果：免疫磁珠分選出的CD133+細(xì)胞，可懸

2、浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球，有較強(qiáng)的增殖能力，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞標(biāo)志物nestin、CD133 陽(yáng)性，并具有腫瘤的核型，分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元β-tubulin 3和星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP 特異性抗原,而nestin、CD133陰性。 結(jié)論：免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜生長(zhǎng)的發(fā)生，能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的腫瘤干細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)合磁珠后其生物學(xué)特性未受到明顯的影響，在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代，進(jìn)一步證實(shí)了腫瘤干細(xì)