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文檔簡介
1、目的:體外培養(yǎng) U251細(xì)胞,分別利用差速離心法和試劑盒兩種方法分離、提純exosome,證明分離提純的物質(zhì)為exosome,并對兩種方法進(jìn)行優(yōu)缺點(diǎn)比較。
方法:體外培養(yǎng) U251細(xì)胞,觀察細(xì)胞貼壁生長良好后,將培養(yǎng)基更換為不添加小牛血清的培養(yǎng)基,1周后將細(xì)胞培養(yǎng)上清液分兩組進(jìn)行收集,分別以差速離心法、試劑盒提純exosome。然后在電子顯微鏡下通過液相載網(wǎng)法觀察形態(tài),并照相,確認(rèn)exosome存在,對比兩組的形態(tài)結(jié)構(gòu),記錄直
2、徑大小,并對兩種方法進(jìn)行比較。
結(jié)果:U251細(xì)胞可以分泌exosome,exosome小囊泡均能夠在差速離心法和試劑盒兩種方法下提取到。通過差速離心機(jī)進(jìn)行差速離心提取的 exosome與試劑盒提取的exosome結(jié)構(gòu)相同,電鏡結(jié)構(gòu)為小囊泡狀,表現(xiàn)為球體、橢球體,中央為低密度區(qū),周圍深染。兩組測量直徑均在35~160nm之間,差速離心法組測量直徑均值為99.33±4.21nm,試劑盒組測量直徑均值為98.08±4.13nm,經(jīng)
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