HMGB1對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞系（BIU-87、5637、T24、E J)及人正常膀胱上皮細(xì)胞（SV-HUC-1)中HMGB1的表達(dá)情況，探討HMGB1對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分、內(nèi)源檢測(cè)
　　1.利用膀胱癌組織芯片技術(shù)，檢測(cè)人正常膀胱上皮細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、5637、T24、EJ)中HMGB1的表達(dá)情況；
　　2.分別使用膀胱癌細(xì)胞系（BIU-87、5637、T

2、24、EJ)及人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)，利用實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)（QPCR)檢測(cè)HMGB1在膀胱癌細(xì)胞系（BIU-87、5637、T24、EJ)及人正常膀胱上皮細(xì)胞（SV-HUC-1)中的mRNA表達(dá)水平；
　　第二部分、功能建模
　　1.過(guò)表達(dá)HMGB1，過(guò)表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞系BIU-87、T24。
　　2.設(shè)計(jì)并構(gòu)建HMGB1靶向敲除質(zhì)粒對(duì)，共轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞系BIU-87、T24，分別

3、篩選出穩(wěn)定的細(xì)胞株。
　　3.Western Blot檢測(cè)細(xì)胞模型中HMGB1蛋白的表達(dá)水平變化。
　　分組：Con，過(guò)表達(dá)NC，HMGB1過(guò)表達(dá)，pTalen NC，pTalen-HMGB1
　　第三部分、功能實(shí)驗(yàn)
　　1.MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖測(cè)定。
　　分組：Con組，亂序siRNA組，HMGB1 siRNA組，NC組，pTalen NC組，pTalen-HMGB1組。
　　2.Transwell檢

4、測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。
　　分組：Con，過(guò)表達(dá)NC，HMGB1過(guò)表達(dá)，pTalen NC，pTalen-HMGB1。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　分組：Con，過(guò)表達(dá)NC，HMGB1過(guò)表達(dá)，pTalen NC，pTalen-HMGB1。
　　結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于正常人膀胱上皮細(xì)胞，膀胱癌細(xì)胞系（BIU-87、T24、5637、EJ)中的HMGB1蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA后的膀胱

5、癌細(xì)胞T24、BIU-87生長(zhǎng)受到抑制；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1質(zhì)粒后膀胱癌細(xì)胞T24、BIU-87生長(zhǎng)同樣受到抑制；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA后，兩株膀胱癌細(xì)胞BIU-87、T24侵襲能力減弱；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1后，兩株膀胱癌細(xì)胞BIU-87、T24侵襲能力也減弱；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA細(xì)胞凋亡率升高；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1細(xì)胞凋亡率升高，且高于HMGB1 siRNA組（尸<0.05)。
　　結(jié)論：