SPOCK1基因?qū)Π螂装┘?xì)胞侵襲和增殖的影響_3529.pdf

1、背景：
　　在我國泌尿系統(tǒng)中，膀胱癌發(fā)病率和死亡率逐年上升，是最常見的惡性腫瘤?，F(xiàn)如今經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)以及根治性膀胱切除+尿流改道手術(shù)，術(shù)后輔以放、化療等仍然是膀胱癌治療的最重要、最有效的方法。但是即使經(jīng)過手術(shù)，輔助放化療，部分膀胱癌治療效果依舊不理想，究其原因歸結(jié)于膀胱癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。膀胱癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡和治療失敗的主要原因，當(dāng)前對膀胱癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未十分清楚，故有必要研究其發(fā)病機(jī)制，尋找有效的治療靶點(diǎn)。SP

2、OCK1(Sparc/osteonectin cwcv and kazal-like domains proteoglycan1)基因編碼的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，被證實(shí)與多種腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在腫瘤細(xì)胞中SPOCK1基因過表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移；反之，沉默SPOCK1的表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞喪失其轉(zhuǎn)移能力。在膀胱癌組織中，已發(fā)現(xiàn)SPOCK1基因存在高表達(dá)，并且SPOCK1高表達(dá)與尿路上皮癌預(yù)后差有關(guān)。通過在膀胱癌細(xì)胞中降低

3、SPOCK1基因，觀察其侵襲和增殖的改變，了解SPOCK1基因?qū)Π螂装┌l(fā)生發(fā)展的影響，從而為膀胱癌機(jī)制研究提供實(shí)驗理論依據(jù)。
　　目的：
　　1、驗證在膀胱癌細(xì)胞中SPOCK1基因的表達(dá)情況。
　　2、通過體外細(xì)胞實(shí)驗進(jìn)一步研究SPOCK1基因?qū)Π螂装┘?xì)胞侵襲和增殖的影響。
　　方法：
　　1、qRT-PCR和 Western Blot方法檢測人輸尿管上皮永生化細(xì)胞（SV-HUC-1），膀胱癌細(xì)胞株5637

4、以及膀胱癌細(xì)胞株T24中目的基因SPOCK1的表達(dá)情況。
　　2、構(gòu)建SPOCK1小干擾RNA片段（siRNA），采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至膀胱癌細(xì)胞株5637中。我們將實(shí)驗分組為空白對照組（Control cells group）、無義序列組（Scrambled siRNA group）和實(shí)驗組（SPOCK1 siRNA group）。通過qRT-PCR檢測各組SPOCK1mRNA相對表達(dá)量情況，Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后

5、SPOCK1蛋白的變化，篩選最佳干擾序列。
　　3、使用RNAi技術(shù)下調(diào)膀胱癌細(xì)胞株5637中SPOCK1基因的表達(dá)，分別使用劃痕實(shí)驗，Transwell法和CCK-8法檢測降低SPOCK1基因的表達(dá)后膀胱癌細(xì)胞侵襲和增殖能力的改變情況。
　　結(jié)果：
　　1、qRT-PCR和Western Blot方法檢測結(jié)果表明，SPOCK1基因相關(guān)mRNA和蛋白在膀胱癌細(xì)胞系中存在過表達(dá)現(xiàn)象，并且在膀胱癌細(xì)胞株5637中表達(dá)較膀胱

6、癌細(xì)胞株T24更高。
　　2、同其它的干擾序列相比，SPOCK1-siRNA-2序列干擾效果最好（P＜0.05）。
　　3、使用RNAi技術(shù)下調(diào)膀胱癌細(xì)胞株5637中SPOCK1基因表達(dá),通過劃痕實(shí)驗，Transwell法和CCK-8法檢測發(fā)現(xiàn)膀胱癌細(xì)胞侵襲和增殖能力明顯受到抑制。
　　結(jié)論：
　　1、SPOCK1基因在膀胱癌細(xì)胞中存在高表達(dá)。
　　2、SPOCK1基因的高表達(dá)促進(jìn)了膀胱癌細(xì)胞的侵襲和增殖能