RNAi沉默Survivin基因對膀胱癌細胞增殖和調亡作用的體外研究.pdf

1、目的:初步探討用RNAi沉默survivin基因對膀胱癌T24細胞增殖和調亡的影響。 方法:擴增并鑒定重組質粒：實驗分為空白對照組，陰性對照組和實驗組，將重組質粒(pTZU6+1-shRNA-survivin)、陰性質粒分別轉染至膀胱癌T24細胞，用RT-PCR檢測T24細胞survivin基因表達的變化；用MTT法觀察T24細胞增殖抑制率；用AO/EB熒光染色檢測和膜聯蛋白V-PI(annexinV/PI)染色流式細胞技術檢測

2、T24細胞調亡的情況；用透射電鏡觀察T24細胞形態(tài)的改變。 結果:酶切及測序鑒定結果表明：重組質粒目的片段插入正確；RT-PCR實驗顯示：轉染pTZU6+1-shRNA-survivin 24h后，實驗組T24細胞survivin基因的表達受到顯著抑制，抑制率為41.77％，與陰性對照組相比有差異顯著性，(P<0.05)；MTT實驗顯示：轉染48h后，實驗組T24細胞增殖抑制率達到最高，為52.53％，與空白對照組及陰性對照組相

3、比有差異顯著性，(P<0.05)；annexinV/PI染色法流式細胞術顯示：轉染24h后，實驗組T24細胞凋亡率為(16.76±1.31)％，與空白對照組及陰性對照組相比有差異顯著性，(P<0.05)；轉染24h后，實驗組透射電鏡觀察可見各期凋亡細胞及凋亡小體，陰性對照組無明顯改變。 結論:轉染pTZU6+1-shRNA-survivin可以顯著下調survivin基因的表達，并可以顯著抑制T24細胞增殖并誘導其自發(fā)凋亡。RN