利用RNAi建立Survivin沉默的細(xì)胞株及對Survivin功能的研究.pdf

1、SurVivin基因(SVV)是1997年由耶魯大學(xué)的DC.Altirei克隆的一個(gè)抗凋亡基因，屬于IAP家族。Survivin基因的組織分布特征具有明顯的細(xì)胞選擇性，這一點(diǎn)與IAP家族的其他成員不同。研究發(fā)現(xiàn)Survivin基因表達(dá)于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，而在正常的終末分化的成人組織中沒有表達(dá)。但是在大多數(shù)的腫瘤組織中有Survivin基因的異常高表達(dá)，并且其表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后有關(guān)。這些都提示我們Survivin基因在腫瘤

2、的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，是一個(gè)有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志，與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，可作為腫瘤基因治療的新靶點(diǎn)。 RNA干擾技術(shù)(RNAl)是近年來新興的基因功能分析、抗腫瘤和抗病毒的有利工具，正在功能基因組學(xué)領(lǐng)域掀起一場真正的革命，被Science評為2001年最重要的成果之一，在很多方面有廣泛的應(yīng)用前景。而siRNA的制備作為RNAl技術(shù)的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，雖然已經(jīng)有了各種制備方法，但是都有其相應(yīng)的缺陷。探討一種快速高效保質(zhì)保量的si

3、RNA制備方法對RNAi技術(shù)的開展具有重要的實(shí)際意義。 在本課題中，研究凋亡抑制基因Survivin野生型(簡寫為Survivin)及其異構(gòu)體Survivin-AEx3(簡寫為Sur-△)在肝細(xì)胞癌中的mRNA表達(dá)情況，確定兩者在腫瘤組織中的高表達(dá)；同時(shí)分別研究兩者與肝細(xì)胞癌(HCC)臨床各項(xiàng)指標(biāo)之間的關(guān)系，從而探討兩者在評價(jià)HCC侵襲性和癌癥進(jìn)展中的價(jià)值。探討兩步PCR擴(kuò)增shRNA表達(dá)框架，建立Survivin沉默的HepG