RNAi技術(shù)干擾Survivin基因?qū)戆〩ep-2細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文RNAi技術(shù)干擾Survivin基因?qū)戆〩ep2細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：劉善廷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉頭頸外科指導(dǎo)教師：婁衛(wèi)華20070510‘，‘!￡；鄭州大學(xué)2007年博l：研究生論文中文摘要傳統(tǒng)腫瘤基因治療的轉(zhuǎn)染效率低、靶向性差、抗癌基因表達(dá)量低的缺點(diǎn)。為解決以上缺點(diǎn)，近年來(lái)RNAi干擾技術(shù)被應(yīng)用于惡性腫瘤基因治療的試驗(yàn)研究。其原理是小片段RNA(siRNA)利用堿基互補(bǔ)的原理，特異性地結(jié)合癌基因的m

2、RNA，干擾其翻譯、轉(zhuǎn)錄形成蛋白質(zhì)的功能，阻抑癌蛋白的生成。使癌細(xì)胞向成熟方向分化或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。RNAi技術(shù)是在核酸水平改變腫瘤操控基因的治療方法，特異性強(qiáng)屆4作用小，有希望成為新的基因治療途徑。Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的tAP家族成員之一，是目前發(fā)現(xiàn)的抗凋亡能力最強(qiáng)的凋亡抑制因子，具有不同于IAP家族其他成員的獨(dú)特性質(zhì)和結(jié)構(gòu)，在正常成人組織中不表達(dá)而選擇性地表達(dá)于惡性腫瘤組織，且與腫瘤細(xì)胞的分化增殖

3、及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這種獨(dú)特的表達(dá)特性及其與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的密切關(guān)系，使其成為惡性腫瘤診斷與治療的新靶點(diǎn)?；谝韵履康模?探討survivin基因在喉癌組織中的表達(dá)及其與喉癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系；2觀察利用RNAi技術(shù)敲除喉癌細(xì)胞中survivin基因?qū)戆┘?xì)胞凋亡的影響，3RNAi技術(shù)作用于活體喉癌細(xì)胞的效果；4RNAi技術(shù)應(yīng)用于活體的安全性。本研究用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)喉鱗癌標(biāo)本中survivin及其它凋亡相關(guān)基因的表達(dá)及其和

4、喉癌l|缶床特點(diǎn)的關(guān)系，探討它們?cè)诤戆┑陌l(fā)生、發(fā)展中的作用。建立以survivin基因?yàn)槟康幕?，質(zhì)粒為載體的siRNA，脂質(zhì)體包埋，轉(zhuǎn)染喉癌Hep2細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況、survivin的表達(dá)和細(xì)胞凋亡。建立Hep2細(xì)胞裸鼠模型，靜脈途徑給藥，觀察瘤體增長(zhǎng)情況，瘤細(xì)胞內(nèi)survivin的表達(dá)和細(xì)胞凋亡。方法1采用免疫組化檢測(cè)人喉鱗癌細(xì)胞中survivin，caspase3，bcl2，bax，p53基因的表達(dá)。2采用細(xì)胞免疫化