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文檔簡介
1、研究目的:
本實驗探討miR-3195在人喉癌Hep-2細胞中的增殖作用及機制,通過構建穩(wěn)定高表達miR-3195的喉癌Hep-2細胞株,觀察miR-3195高表達后對人喉癌細胞株Hep-2裸鼠移植瘤增殖能力的影響,了解喉癌中miR-3195的生物學功能,通過生物信息學分析miR-3195可能調控的靶基因,初步分析其分子機制。
方法:
1、應用MTT實驗觀察miR-3195過表達后對喉癌Hep-2細胞增殖能
2、力的影響。
2、建立裸鼠移植瘤模型裸鼠皮下注入miR-31955.7倍/Hep-2, pshRNA-miR/Hep-2和Hep-2三組細胞建立人喉癌異種移植瘤模型,監(jiān)測三種不同細胞接種后裸鼠移植瘤的腫瘤形成及腫瘤生長情況。
3、生物信息學分析對 miR-3195可能的靶基因進行預測。
4、 Western blot驗證miR-3195與其靶基因在喉癌細胞中的調控關系。
結果:
1、通過M
3、TT比色法分析顯示,以Hep-2組,pshRNA-miR/Hep-2及miR-31955.7倍/Hep-2細胞為研究對象,觀察miR-3195高表達后對喉癌Hep-2增殖能力的影響,其結果表明,miR-31955.7倍/Hep-2組細胞增殖落后Hep-2組和 pshRNA-miR/Hep-2組,表明miR-3195高表達后抑制Hep-2細胞的增殖。
2、三組細胞皮下接種后在裸鼠體內均成瘤,接種pshRNA-miR/Hep-2細
4、胞和Hep-2細胞組移植瘤較接種miR-31955.7倍/Hep-2細胞組移植瘤生長快。接種后30天處死裸鼠,pshRNA-miR/Hep-2細胞和Hep-2細胞組移植瘤重量明顯高于miR-31955.7倍/Hep-2細胞組。
3、靶基因預測軟件預測miR-31953’UTR特異性靶基因,發(fā)現(xiàn)有4個與腫瘤相關,其中預測結果顯示:miR-3195與ST3GAL23’UTR有2個結合位點,miR-3195與TBX13’UTR有1個
5、結合位點。
4、Western blot蛋白印記法檢測miR-3195與其靶基因ST3GAL2、TBX1在喉癌細胞中的調控關系:結果表明:miR-31955.7倍/Hep-2組較pshRNA-miR/Hep-2細胞和Hep-2組TBX1蛋白表達量明顯下降,而ST3GAL2則下降不明顯,提示miR-3195抑制喉癌的增殖可能與抑制TBX1基因表達有關。
結論:
1、miR-3195高表達后可以抑制喉癌Hep-
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