腺病毒介導(dǎo)的mda-7-IL-24基因?qū)θ撕戆┘?xì)胞Hep-2的凋亡作用.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的mda-7/IL-24基因?qū)θ撕戆┘?xì)胞Hep-2的凋亡作用姓名：劉海斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)指導(dǎo)教師：范靜平;廖建春20100501第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文組均大量脫離，P B S 處理組也有很多細(xì)胞脫離。3 ．熒光顯微鏡下觀察H o e c h s t 3 3 2 5 8 凋亡染色結(jié)果：A d - m d a 7 處理組細(xì)胞固縮，細(xì)胞核致密濃染，顏色發(fā)白：A d ．G F P 處

2、理組細(xì)胞也有一些收縮和2 0 ％左右的細(xì)胞脫離，但無(wú)凋亡染色特征；P B S 處理組細(xì)胞形態(tài)飽滿(mǎn)，生長(zhǎng)正常。4 ．P I 染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果：以M O I = 3 0 感染4 8 h 后C o n t r o l 組S u b G l 期比例5 ．8 4 ％；E a d 組S u b G l 期比例為1 4 ．5 3 ％；A d - m d a 7 處理，S u b G l 期比例為2 1 ．6 5 ％，凋亡細(xì)胞所占比例遞增；M O

3、 I = 5 0 ，G 2 M B l o c k 檢測(cè)結(jié)果：A d ．m d a 7 組G 2 ／M B l o c k 期比例為4 0 ．6 0 ％，A d ．G F P 組G 2 ／MB l o c k 期比例為7 ．9 3 ％，P B S 組相應(yīng)G 2 ／M B l o c k 期比例為2 ．2 4 ％?！窘Y(jié)論】1 ．重組人5 腺病毒系統(tǒng)( 由穿梭質(zhì)粒p A d T r a c k C M V ，腺病毒骨架質(zhì)粒A d E a s

4、 y1 ，以及重組優(yōu)化大腸桿菌B J 5 1 8 3 組成) 中，穿梭質(zhì)粒p A d T r a c k C M V _ J 2 構(gòu)建有綠色熒光蛋白( G F P ) 以及多克隆區(qū)域，可以用來(lái)搭載m d a - 7 f I L ．2 4 。骨架質(zhì)粒A d E a s y l 缺失了腺病毒基因組的E 1 區(qū)和E 3 區(qū)，使得所生產(chǎn)的腺病毒不能在9 1 1 和2 9 3 以外的細(xì)胞中自我擴(kuò)增，保證了實(shí)驗(yàn)的劑量可控性和以及生物安全性，但是又保

5、留了病毒高效的感染能力以及搭載基因的蛋白表達(dá)能力。2 ．A d - m d a - 7 ／I L - 2 4 轉(zhuǎn)染喉癌h e p - 2 細(xì)胞后4 8 h 檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)較理想，7 2 h 細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)明顯變差，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞大量脫離，不適合用于進(jìn)一步細(xì)胞處理和檢測(cè)。3 ．腺病毒搭載的m d a - 7 ／I L - 2 4 對(duì)喉癌h e p - 2 細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制和促凋亡作用，且對(duì)喉癌細(xì)胞生長(zhǎng)的阻滯作用可能與感染復(fù)數(shù)正相關(guān)。【關(guān)鍵詞】重組