人mda-7-IL-24對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤的作用研究.pdf

1、黑色素瘤分化相關(guān)基因-7(mda-7，又稱IL-24)是1995年采用減數(shù)雜交技術(shù)在誘導(dǎo)終末分化的人黑色素瘤細(xì)胞HO-1中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因。mda-7/IL-24在很多實(shí)體腫瘤(包括黑色素瘤、前列腺癌、宮頸癌、小細(xì)胞肺癌、惡性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤等)中異位表達(dá)時(shí)具有腫瘤細(xì)胞特異性的抑制生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡作用；此外，還可以抑制腫瘤血管新生、具有抗腫瘤“旁觀者效應(yīng)”以及能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)射線的敏感性。研究發(fā)現(xiàn)mda-7/IL-24的抗腫瘤作用機(jī)制是多

2、種多樣的。mda-7/IL-24在造血系統(tǒng)惡性腫瘤中是否具有抗腫瘤作用迄今國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道。 首先檢測(cè)了造血系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞系和患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMC)mda-7/IL-24的表達(dá)情況，在11個(gè)代表不同來(lái)源的造血系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞系和49例患者中都沒(méi)有檢測(cè)到目的基因的轉(zhuǎn)錄。 選取了代表不同來(lái)源的2個(gè)細(xì)胞系：K562和Namalwa，觀察mda-7/IL-24對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤的作用。采用RT-PCR方法從活化的人

3、PBMC中克隆mda-7/IL-24編碼區(qū)全長(zhǎng)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建的重組真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染K562和Namalwa，RT-PCR和Westernblot方法鑒定轉(zhuǎn)染效果。選取表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞株，通過(guò)MTT、細(xì)胞周期、集落形成實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)特性、集落形成能力，Annexin-v/PI方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與轉(zhuǎn)染空載體對(duì)照和未轉(zhuǎn)染的Namalwa細(xì)胞相比，穩(wěn)定表達(dá)mda-7/IL-24的Namalwa細(xì)胞株腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)

4、狀態(tài)、細(xì)胞增殖活力以及集落形成能力明顯下降；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mda-7/IL-24的Namalwa細(xì)胞凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染空載體的對(duì)照組。在轉(zhuǎn)染的另一個(gè)細(xì)胞系K562中沒(méi)有觀察到mda-7/IL-24的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mda-7/IL-24組和空載體對(duì)照組相比，MTT以及集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mda-7/IL-24的K562細(xì)胞凋亡率為2.73％±0.42％，轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞凋亡率為3.63％±0.27％，即m

5、da-7/IL-24在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的K562細(xì)胞中亦不具有誘導(dǎo)凋亡作用。上述結(jié)果表明mda-7/IL-24對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤Namalwa細(xì)胞具有明顯的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。在對(duì)mda-7/IL-24的抗腫瘤機(jī)制的初步探索中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染mda-7/IL-24的Namalwa細(xì)胞株bcl-2、β-catenin、NF-κB基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)；提示了mda-7/IL-24在Namalwa細(xì)胞中作用的一些可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和機(jī)制。mda-7/IL

6、-24可能是通過(guò)使Namalwa細(xì)胞中抗凋亡因子bcl-2和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子β-catenin表達(dá)下調(diào)來(lái)實(shí)現(xiàn)其抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡作用的。NF-κB在mda-7/IL-24介導(dǎo)的Namalwa細(xì)胞中的作用尚不清楚。mda-7/IL-24對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病急變細(xì)胞系K562沒(méi)有抗腫瘤作用可能與K562細(xì)胞中mda-7/IL-24蛋白的翻譯阻滯有關(guān)。 進(jìn)一步檢測(cè)了mda-7/IL-24在白血病細(xì)胞系誘導(dǎo)分化后的表達(dá)情況。在白血病細(xì)

7、胞系分別向巨核細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞定向分化的過(guò)程中檢測(cè)到了mda-7/IL-24mRNA的轉(zhuǎn)錄。有趣的是，在單核-巨噬細(xì)胞分化后同時(shí)還檢測(cè)到兩個(gè)短片段，測(cè)序結(jié)果證實(shí)為GENBANK中沒(méi)有報(bào)道過(guò)的mda-7/IL-24的選擇性剪切體。這種組織特異的剪切體近年來(lái)陸續(xù)得到重視，推測(cè)其與組織器官的功能特化有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在誘導(dǎo)分化的單核-巨噬細(xì)胞中可能存在組織特異的mda-7/IL-24的轉(zhuǎn)錄、剪切，其在單核-巨噬細(xì)胞中的作用和意義同樣值得深