人IL-24對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用研究.pdf

1、白細(xì)胞介素(IL-24)又稱黑色素瘤分化相關(guān)基因-7(melanom.differentiationassociate.gene-7，MDA-7)，是一種細(xì)胞因子且屬于白介素-10家族。最初是在人黑色素瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，該基因在誘導(dǎo)分化的黑色素瘤細(xì)胞中高表達(dá)，并能促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞分化。該基因主要表達(dá)于胸腺、脾、外周血單核細(xì)胞等免疫組織和分化的黑色素細(xì)胞，其他組織細(xì)胞可誘導(dǎo)表達(dá)。該基因具有抗腫瘤作用，已引起廣泛關(guān)注。
　　 為了研究

2、IL-24的功能，將該基因克隆到融合表達(dá)載體pET-28a(+)相應(yīng)的酶切位點(diǎn)上，得到融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-IL-24，經(jīng)PCR、酶切鑒定以及測(cè)序證明重組是正確的。將該重組子轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞E.col.BL21(DE3)，經(jīng)終濃度為1mM的IPTG誘導(dǎo)后，在28kDa處有一特異性蛋白條帶，與預(yù)期值相符。經(jīng)超聲波裂解菌體分離包涵體并離心、洗滌；對(duì)進(jìn)行包涵體溶解后采用親和層析純化純化融合蛋白6xHis-IL-24。以該重組蛋白為抗原

3、免疫雄性新西蘭大白兔制備多克隆抗體，效價(jià)大于1：51200；Wester.blot實(shí)驗(yàn)呈陽性，為進(jìn)一步研究該蛋白的功能分析奠定了基礎(chǔ)。
　　 我們進(jìn)一步構(gòu)建IL-24真核表達(dá)質(zhì)粒并研究其體外表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。采用重組DNA技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-IL24。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒及空載體外轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的體外增殖活力；同時(shí)用激光共聚焦顯微鏡觀察其細(xì)胞核的變化。結(jié)果表明：pEGFP-