人MDA-7-IL-24及其剪接體IL-24as1對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤的作用研究.pdf

1、黑色素瘤分化相關(guān)基因-7(mda-7，又稱IL-24)是1995年采用減數(shù)雜交技術(shù)在誘導(dǎo)終末分化的人黑色素瘤細(xì)胞HO-1中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因。mda-7/IL-24在很多實(shí)體腫瘤(包括黑色素瘤、前列腺癌、宮頸癌、小細(xì)胞肺癌、惡性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤等)中異位表達(dá)時(shí)具有腫瘤細(xì)胞特異的抑制生長和誘導(dǎo)凋亡作用；此外，還可以抑制腫瘤血管新生、具有抗腫瘤“旁觀者效應(yīng)”以及能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)射線的敏感性。研究發(fā)現(xiàn)mda-7/IL-24在實(shí)體瘤中的抗腫瘤作用

2、機(jī)制是多種多樣的。mda-7/IL-24在造血系統(tǒng)惡性腫瘤中是否具有抗腫瘤作用迄今國內(nèi)外還沒有文獻(xiàn)報(bào)道。此外，本文在前期工作中，在誘導(dǎo)U937向單核．巨噬細(xì)胞分化后發(fā)現(xiàn)了mda-7/IL-24的選擇性剪接體IL-24asl。IL-24asl的作用尚不清楚。 為了探索mda-7/IL-24和IL-24asl在造血系統(tǒng)惡性腫瘤中的作用，本文構(gòu)建了MDA-7/IL-24及其剪接體IL-24asl的真核表達(dá)載體，用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染人白血病細(xì)

3、胞系K562，RT-PCR和Western blot方法鑒定轉(zhuǎn)染效果及目的基因的表達(dá)情況。選取表達(dá)陽性細(xì)胞株，通過MTT、細(xì)胞周期、集落形成實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)MDA-7/IL-24及其剪接體IL-24asl對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、生長特性、集落形成能力、凋亡情況和體內(nèi)致瘤性變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與轉(zhuǎn)染空載體對(duì)照和未轉(zhuǎn)染的K562細(xì)胞相比，穩(wěn)定表達(dá)mda-7/IL-24以及IL-24asl的細(xì)胞株細(xì)胞生長狀態(tài)、細(xì)胞增殖活力以及集落形成能力明顯下降(p

4、<0.05)。裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了上述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。表明，MDA-7/IL-24及其剪接體IL-24asl均有阻滯細(xì)胞周期和抑制腫瘤生長的作用。 本文進(jìn)一步用基因芯片初步分析了轉(zhuǎn)染mda-7/IL-24的K562細(xì)胞株K562-IL-24-3xin和轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞K562-V的基因表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)，K562-IL-24-3xin細(xì)胞株p21、BCCIP、PAK6等與細(xì)胞周期相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)，GOS2、SM[JRF2等基因的下調(diào)

5、，這與我們實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞周期的測(cè)定發(fā)現(xiàn)細(xì)胞阻滯在G0/G1期相符合。提示，mda-7/IL-24對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病急變細(xì)胞系K562有抗腫瘤作用，主要通過細(xì)胞周期阻滯抑制腫瘤細(xì)胞的生長。 本文在對(duì)IL-24asl抗腫瘤機(jī)制的初步探索中發(fā)現(xiàn)，1)細(xì)胞周期的阻滯可能主要由TP53INPl和p73上調(diào)間接作用引起；2)結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)和組化染色，K562-IL-24asl-1D5有向巨核分化的趨勢(shì)，表現(xiàn)為DAB2和CD36的上調(diào)；3)TWI