人IL-24基因的克隆、表達(dá)及活性鑒定.pdf

1、目的:克隆人IL-24基因,在原核和真核系統(tǒng)中進(jìn)行重組表達(dá)并檢測表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性.方法:采用RT-PCR技術(shù)克隆人IL-24基因.將其重組到pUC19質(zhì)粒,經(jīng)測序鑒定后,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBV220-hIL-24和pcDNA3-hIL-24.經(jīng)鑒定后分別導(dǎo)入原核和真核細(xì)胞進(jìn)行表達(dá).然后分別用SDS-PAGE、MTT、RT-PCR、FCM、TUNEL及ELISA等方法鑒定hIL-24基因的表達(dá)和研究表達(dá)產(chǎn)物的功能及生物學(xué)活性.結(jié)果:成功獲

2、得621bp的人IL-24基因,序列測定結(jié)果與GenBank報(bào)道的完全一致,原核和真核重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)構(gòu)建正確,原核表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)透析復(fù)性和初步純化后,通過MTT、TUNEL和FCM等方法檢測發(fā)現(xiàn)所表達(dá)的rhIL-24具有誘導(dǎo)A549肺腺癌細(xì)胞凋亡的作用.結(jié)果顯示hIL-24基因不僅可在COS-7和CHO兩種細(xì)胞中表達(dá),而且表達(dá)的rhIL-24具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)A549肺腺癌細(xì)胞凋亡的作用.結(jié)論:該基因系國內(nèi)首次獲得并經(jīng)序列測定證實(shí)的hIL-24