人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子基因的克隆、表達與生物學活性鑒定和人骨形態(tài)發(fā)生蛋白基因的克隆、表達.pdf

1、神經(jīng)退行性疾病，嚴重威脅人類的健康和壽命。睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)能促進多種神經(jīng)元的存活，外源性CNTF能有效地改善受損神經(jīng)的功能，因此CNTF用于治療神經(jīng)損傷和神經(jīng)退行性疾病。此外，CNTF處理的病人出現(xiàn)脂肪儲存減少，體重明顯下降。CNTF具有類似于Leptin作用，調節(jié)下丘腦飲食中心抑制飲食，引起脂肪動員，下調體重。對飲食誘導的肥胖小鼠模型，CNTF下調體重作用比Leptin更加明顯。研究CNTF下調體重的機制可為減肥藥物的研制

2、開拓思路。 本研究克隆了人CNTF基因，實現(xiàn)了在大腸桿菌中高效表達重組CNTF。目標蛋白以包涵體的形式存在，表達量占全菌總蛋白的35％以上，經(jīng)變性、復性純化獲得純度大于90％的目標蛋白。蛋白分子量大約為22.9kD，等電點測定為pH6.6。 分離10天齡的雞胚背根神經(jīng)節(jié)，經(jīng)0.125％胰酶消化后，純化神經(jīng)元細胞，用于檢測重組的人CNTF(rhCNTF)對神經(jīng)元的影響。接種1000個神經(jīng)元細胞到預先用多聚鳥氨酸—層粘蛋白包

3、被的96孔細胞培養(yǎng)板上，加入用培養(yǎng)液(10％胎牛血清的DMEM)稀釋的CNTF樣品，以培養(yǎng)液為陰性對照組，大鼠CNTF為陽性對照組，37℃，5％CO2培養(yǎng)24h，計算存活的神經(jīng)元細胞數(shù)?；钚缘鞍椎墨@得為進一步研究其生理學作用機制奠定了基礎。 因實驗室工作需要，在完成上述工作的同時，我們還研究人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4(Humanbonemorphogeneticprotein-4，hBMP-4)cDNA基因的克隆和表達。我們提取了人肺