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文檔簡介
1、神經(jīng)退行性疾病,嚴(yán)重威脅人類的健康和壽命。睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)能促進(jìn)多種神經(jīng)元的存活,外源性CNTF能有效地改善受損神經(jīng)的功能,因此CNTF用于治療神經(jīng)損傷和神經(jīng)退行性疾病。此外,CNTF處理的病人出現(xiàn)脂肪儲存減少,體重明顯下降。CNTF具有類似于Leptin作用,調(diào)節(jié)下丘腦飲食中心抑制飲食,引起脂肪動員,下調(diào)體重。對飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型,CNTF下調(diào)體重作用比Leptin更加明顯。研究CNTF下調(diào)體重的機(jī)制可為減肥藥物的研制
2、開拓思路。 本研究克隆了人CNTF基因,實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中高效表達(dá)重組CNTF。目標(biāo)蛋白以包涵體的形式存在,表達(dá)量占全菌總蛋白的35%以上,經(jīng)變性、復(fù)性純化獲得純度大于90%的目標(biāo)蛋白。蛋白分子量大約為22.9kD,等電點(diǎn)測定為pH6.6。 分離10天齡的雞胚背根神經(jīng)節(jié),經(jīng)0.125%胰酶消化后,純化神經(jīng)元細(xì)胞,用于檢測重組的人CNTF(rhCNTF)對神經(jīng)元的影響。接種1000個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞到預(yù)先用多聚鳥氨酸—層粘蛋白包
3、被的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,加入用培養(yǎng)液(10%胎牛血清的DMEM)稀釋的CNTF樣品,以培養(yǎng)液為陰性對照組,大鼠CNTF為陽性對照組,37℃,5%CO2培養(yǎng)24h,計(jì)算存活的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)?;钚缘鞍椎墨@得為進(jìn)一步研究其生理學(xué)作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 因?qū)嶒?yàn)室工作需要,在完成上述工作的同時(shí),我們還研究人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4(Humanbonemorphogeneticprotein-4,hBMP-4)cDNA基因的克隆和表達(dá)。我們提取了人肺
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