人TPO的基因克隆、重組表達(dá)和生物學(xué)效應(yīng)初探.pdf

1、研究目的:血小板生成素(TPO)是哺乳動物調(diào)節(jié)血小板生成的主要細(xì)胞因子,具有刺激巨核細(xì)胞集落生成的功能.體外實(shí)驗(yàn)表明,TPO既可以促進(jìn)早期巨核細(xì)胞分化,如形成巨核細(xì)胞集落形成單位,也可作用于晚期巨核細(xì)胞的成熟,如影響巨核細(xì)胞的數(shù)目、大小及形態(tài).同時(shí),TPO可協(xié)同IL-3或干細(xì)胞因子刺激巨核細(xì)胞集落形成,但對紅系和?！獑蜗导?xì)胞集落的形成影響很小.動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí),注射TPO后,骨髓巨核細(xì)胞集落形成單位(CFU-M)增加,外周血小板計(jì)數(shù)與T

2、PO注射劑量呈正相關(guān).由于TPO對血小板減少癥的良好療效,其基因工程研究已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn).為了深入研究TPO的體內(nèi)分布、代謝和生物學(xué)功能及制備TPO單克隆抗體,我們采用RT-PCR技術(shù)獲得了成熟TPO的全長cDNA并進(jìn)行了其在原核系統(tǒng)表達(dá)的研究;同時(shí),制備動物模型,研究重組人TPO對血小板減少癥小鼠血小板生成的影響;Iodogen法標(biāo)記重組人TPO蛋白,探討TPO在動物體內(nèi)的分布規(guī)律;此外,還構(gòu)建了重組人TPO昆蟲桿狀病毒表達(dá)載

3、體.結(jié)論:1.該研究成功地構(gòu)建了重組克隆質(zhì)粒pMD18-T-TPO和重組表達(dá)質(zhì)粒pQE30-TPO,并對重組TPO蛋白進(jìn)行了初步純化.2.用<'125>I成功標(biāo)記了重組蛋白rhTPO,研究其在小鼠體內(nèi)的代謝、分布,結(jié)果顯示<'125>I-rhTPO在富含骨髓的骨組織中高分布,提示骨髓是TPO作用的靶組織.3.成功制備了小鼠血小板減少模型,證實(shí)了rhTPO的促血小板生成作用.4.構(gòu)建了重組人TPO桿狀病毒表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究rhTPO在