雞TPO基因的克隆及其遺傳變異效應(yīng)研究.pdf

1、甲狀腺過氧化物酶位于甲狀腺細(xì)胞頂緣的細(xì)胞膜上，是甲狀腺激素合成過程中的關(guān)鍵酶。它主要是在酪氨酸碘化和碘化酪氨酸耦聯(lián)至甲狀腺蛋白上形成四碘甲狀腺原氨酸和三碘甲狀腺原氨酸的過程中起重要作用。為研究雞甲狀腺過氧化物酶基因(TPO)的遺傳變異位點及其與生長和屠體性狀的相關(guān)性，本研究以固始雞-安卡雞F2代資源群為試驗材料，采用PCR-RFLP和DNA池測序技術(shù)檢測了雞TPO基因三個位點的遺傳變異；本研究用RT-PCR方法利克隆技術(shù)克隆了固始雞的T

2、PO基因，利用生物信息學(xué)軟件對該基因進(jìn)行序列分析和蛋白結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測；利用半定量方法分析了TPO基因在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸肌、腿肌、大腦、小腦、下丘腦和甲狀腺中的組織表達(dá)情況。結(jié)果如下：
　　 1.檢測到了TPO基因的三個多態(tài)變異位點，其中c.111G>A位點位于第二外顯子，c.430G>A位點位于第四外顯子，g.29996C>T位點位于第十三內(nèi)含子；關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)：c.111G>A突變位點與雞的2周齡體重，12周齡脛

3、圍，4周齡胸深，8、12周齡胸骨長以及胸肌重和腿肌重顯著相關(guān)(P<0.05)，與初生重和12周齡胸角極顯著相關(guān)(P<0.01)，對4周胸深和12周胸角具有顯著的加性效應(yīng)(P＜0.05)；c.430G>A突變位點與雞的8周齡脛長，4周齡骨盆寬呈顯著相關(guān)(P<0.05)，與8周齡胸寬和8周齡體斜長呈極顯著相關(guān)(P<0.01)，對8周胸寬具有顯著的加性效應(yīng)(P<0.05)；g.29996C>T突變位點與雞后期的生長發(fā)育有關(guān)，其與雞的12周齡體

4、重，12周齡胸骨長，12周齡胸角以及心臟重、肌胃重、爪重和腿重呈顯著相關(guān)(P<0.05)，對爪重具有顯著的加性效應(yīng)(P<0.05)。
　　 2.克隆了固始雞的TPO基因部分cDNA序列，該編碼區(qū)長為968bp，序列分析獲得了960bp長的ORF，共編碼319個氨基酸；與GenBank上預(yù)測的序列相比，其編碼區(qū)第481位存在G-A的突變，導(dǎo)致其編碼的氨基酸由丙氨酸變成蘇氨酸；運用MEGA4.1軟件構(gòu)建不同物種的進(jìn)化樹，結(jié)果顯示雞T