重組人乙酰肝素酶的克隆表達(dá)及其生物學(xué)特性的初步研究.pdf

1、乙酰肝素酶(Heparanase,HPA)是能特異性降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中的硫酸肝素糖蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG)的內(nèi)切糖苷酶.由于HSPG具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的重要作用,HPA是多種腫瘤具有轉(zhuǎn)移活性的標(biāo)志之一,已經(jīng)成為了研究腫瘤轉(zhuǎn)移的重要靶點(diǎn).但由于HPA獲取困難,其分子結(jié)構(gòu)、生物學(xué)功能、活性調(diào)節(jié)等多方面尚待進(jìn)一步闡明.近年來的研究發(fā)現(xiàn)全長(zhǎng)HPA cDNA編碼了HPA酶原前體,在合成與分

2、泌的過程中去除了信號(hào)肽,形成低活性的HPA酶原,再經(jīng)過特異性的調(diào)控激活后被未知的水解酶切割為大小不同的2個(gè)亞基,二者再通過非共價(jià)結(jié)合形成異源二聚體,此異源二聚體可能就是HPA的活性形式.為探究HPA結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系以及其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用,需要獲得HPA重組蛋白以及其抗體.因此該文利用基因重組技術(shù),構(gòu)建表達(dá)巴斯得畢赤酵母和大腸桿菌重組工程菌,實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中以融合蛋白形式表達(dá)HPA酶原及其大亞基,并分析了影響HPA基因在不同表達(dá)系統(tǒng)中